材料与仪器
组织匀浆
PME 缓冲液
匀浆器
PME 缓冲液
匀浆器
步骤
1. 对感兴趣的组织匀浆，每克组织加 1 ml PME 缓冲液。
PME 缓冲液：
0.1 mol/L PIPES，pH 6.9
2 mmol/L EGTA
1 mmol/L MgSO4
1 mmol/L DTT ( 或 DTE)
0.5 mmol/L GTP
2. 匀浆物以 150000 g 离心 60 分钟。
3. 小心地转移上清，避兔任何污染颗粒，它们可能来自于沉淀块或可能发现于沉淀块上方的松的小碎片聚集物。
4. 测量上清的体积，调整紫杉醇浓度到 20 μmol/L。
5. 在 37℃ 孵育 15~20 分钟。
6. 于 37℃ 小心地在溶液下铺几毫升含 10% 蔗糖和 10 μmol/L 紫杉醇的 PME 缓冲液。
7. 在 25℃ 以 45000 g 离心 30 分钟收集组装了的微管。
8. 去掉上清，用温的 PME 缓冲液小心地冲洗离心管壁，小心不要打碎微管沉淀物。
9. 用少量含 20 μmol/L 紫杉醇的 PME 重悬沉淀物。
10. 前面步骤 6 和 7 —样，通过在蔗糖垫层上离心以沉淀微管。
PME 缓冲液：
0.1 mol/L PIPES，pH 6.9
2 mmol/L EGTA
1 mmol/L MgSO4
1 mmol/L DTT ( 或 DTE)
0.5 mmol/L GTP
2. 匀浆物以 150000 g 离心 60 分钟。
3. 小心地转移上清，避兔任何污染颗粒，它们可能来自于沉淀块或可能发现于沉淀块上方的松的小碎片聚集物。
4. 测量上清的体积，调整紫杉醇浓度到 20 μmol/L。
5. 在 37℃ 孵育 15~20 分钟。
6. 于 37℃ 小心地在溶液下铺几毫升含 10% 蔗糖和 10 μmol/L 紫杉醇的 PME 缓冲液。
7. 在 25℃ 以 45000 g 离心 30 分钟收集组装了的微管。
8. 去掉上清，用温的 PME 缓冲液小心地冲洗离心管壁，小心不要打碎微管沉淀物。
9. 用少量含 20 μmol/L 紫杉醇的 PME 重悬沉淀物。
10. 前面步骤 6 和 7 —样，通过在蔗糖垫层上离心以沉淀微管。
来源：丁香实验
