分离微管和微管相关蛋白实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

通过组装/解聚从缺少组装驱动成分的缓冲液中分离微管

1. 收集脑组织（几百克） (1) 如果从屠宰场取脑（猪） ① 只要美国地方检察官允许，在宰杀后尽快收集脑（猪 )。 ② 把脑一个一个地放在薄塑料袋里，立即浸入冰水混合物中，运到实验室。 ③ 在冰库里，研究者带着橡胶手套取出脑、表面的血管、血凝块和脑膜。 ④ 用剪刀把脑剪成小块（1~2 cm），放到冰浴的小烧杯中。 (2) 如果是买的鸡 ① 用锋利的剪刀将鸡断头。 ② 将脑取出放到

在含甘油的缓冲液中通过组装/解聚分离微管

1. 拿到脑组织（小牛或奶牛），以每克组织 0.75 ml PME 的比例进行匀浆。 2. 匀浆物在 4℃ 以 100000 g 离心 45 分钟。 3. 转移上清并用等体积 PME-G 稀释。上清在 37℃ 温育 30~40 分钟。 4. 在 25℃ 以 100000 g 离心 45 分钟收集微管。 5. 弃掉上清，将紧密成团的微管沉淀物从管底刮下来，加最初匀浆时所用体积 1/4 的 P

在紫杉醇这种微管稳定剂存在时通过组装的方法分离微管

1. 对感兴趣的组织匀浆，每克组织加 1 ml PME 缓冲液。 PME 缓冲液： 0.1 mol/L PIPES，pH 6.9 2 mmol/L EGTA 1 mmol/L MgSO4 1 mmol/L DTT ( 或 DTE) 0.5 mmol/L GTP 2. 匀浆物以 150000 g 离心 60 分钟。 3. 小心地转移上清，避兔任何污染颗粒，它们可能来自于沉淀块或可能发

从用紫杉醇稳定的微管中分离微管相关蛋白

一、通过盐柚提从用紫杉醇稳定的微管中分离微管相关蛋白 1. 得到沉降下来的经紫杉醇稳定了的微管。或者可以通过加紫杉醇到 20 μmol/L 来稳定用组装/解聚方法制备的微管。 2. 于 37℃ 在微管中加 NaCl 使终浓度为 0.35 mol/L。 3. 37℃ 在溶液下面铺几毫升含 10% 蔗糖和 10 μmol/L 紫杉醇的 PME 缓冲液，立即在 25℃ 以 45000 g 离心 3

通过ATP释放法从用紫杉醇稳定的微管中分离基于微管的运动蛋白

一、分离驱动蛋白 1. 以每克组织 1.5 ml PME 缓冲液的比例进行组织匀浆，匀浆物在 39000 g 离心 30 分钟。 PME 缓冲液： 0.1 mol/L PIPES，pH 6.9 2 mmol/L EGTA 1 mmol/L MgSO4 1 mmol/L DTT ( 或 DTE ) 0.1 mmol/L GTP 2. 转移上清并在 100000 g 离心 1 小时。