细胞核的预先分离

细胞
PBS RSB 缓冲液
医用台式离心机 Dounce 匀浆器

1. 在 4℃ 用 PBS 清洗细胞，用一医用台式离心机低速离心。然后用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液悬浮沉淀。每 10⁷ 个细胞用 1 ml 缓冲液。用 0.002 英寸间隙的 Dounce 匀浆器破碎细胞。

含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液：

10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

10 mmol/L NaCl

1.5 mmol/L MgCl₂

每毫升溶液中含的 Tween-DOC 贮存液和 850 μl RSB。用前从 100X 的贮存液中加入 VRC 和 AEBF，至终浓度为 2 mmol/L 和 1 mmol/L。

Tween 40 和 DOC 贮存液：

6.67% (w/v) Tween 40

3.33% (w/v) 脱氧胆酸钠

可分成小份冻存于 -20℃

2. 4℃，1000 g 离心 3 分钟沉淀细胞核。用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液洗后再次沉淀细胞核。