细胞核的分离
互联网
11553
细胞核作为一个功能单位，完整地保留细胞物质，并指导RNA合成，后者为蛋白质其它细胞组分合成所必需。因此，细胞的分离是研究基因表达及细胞核形态结构的首要步骤。不同组织来源的细胞经匀浆后，用分级离心或声波处理等方法进行分离纯化。
操作方法：
1．制备巨噬细胞：取体重约200g大鼠一只，腹腔注射0.2%配制的1%巯基乙酸钾5~6ml两次，5天后处死。冰浴中用生理盐水收集腹腔细胞，生理盐水洗涤细胞、1500r/min×5min离心收集细胞，沉淀80~90%为巨噬细胞。
2．将细胞悬液在5倍体积的10mmol/L Tris -HCl pH7.4，10mmol/LNaCl，1.5mmol/L MgCl 2 中，加入10ul 10% SDS /ml，用玻璃匀浆器轻轻地匀浆。
3．加入2ml 0.34mol/L蔗糖，10mmol/L MgCl 2 再匀浆1次，下面铺一层0.88mol/L蔗糖。800g ×5min 离心，收集沉淀的细胞核。
4．在0.88mol/L蔗糖中再纯化一次，然后将细胞悬浮在10ml 0.34mol/L蔗糖，0.05mmol/L MgCl 2 。用声波处理5~6次，每次10s。
5．加2倍体积0.88mol/L蔗糖，8oog×30min离心，沉淀部分为细胞核。
6．将细胞核悬浮在2.4mol/L蔗糖中，50，000g×1h离心，沉淀为纯细胞核，将其保存在0.25mol/L蔗糖、0.55mmol/L MgCl 2 中备用。
操作方法：
1．制备巨噬细胞：取体重约200g大鼠一只，腹腔注射0.2%配制的1%巯基乙酸钾5~6ml两次，5天后处死。冰浴中用生理盐水收集腹腔细胞，生理盐水洗涤细胞、1500r/min×5min离心收集细胞，沉淀80~90%为巨噬细胞。
2．将细胞悬液在5倍体积的10mmol/L Tris -HCl pH7.4，10mmol/LNaCl，1.5mmol/L MgCl 2 中，加入10ul 10% SDS /ml，用玻璃匀浆器轻轻地匀浆。
3．加入2ml 0.34mol/L蔗糖，10mmol/L MgCl 2 再匀浆1次，下面铺一层0.88mol/L蔗糖。800g ×5min 离心，收集沉淀的细胞核。
4．在0.88mol/L蔗糖中再纯化一次，然后将细胞悬浮在10ml 0.34mol/L蔗糖，0.05mmol/L MgCl 2 。用声波处理5~6次，每次10s。
5．加2倍体积0.88mol/L蔗糖，8oog×30min离心，沉淀部分为细胞核。
6．将细胞核悬浮在2.4mol/L蔗糖中，50，000g×1h离心，沉淀为纯细胞核，将其保存在0.25mol/L蔗糖、0.55mmol/L MgCl 2 中备用。
