从培养细胞或组织中制备细胞核基质/中间纤维骨架结构实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

从培养细胞中制备细胞核基质/中间纤维骨架结构

1. 在 4℃ 用 PBS 洗细胞一次。 2. 在 4℃ 用含 0.5% Tritron X-100 的细胞骨架缓冲液抽提细胞 3 到 5 分钟。直到消化步骤，每 107 个细胞最少要用 1 ml 缓冲液，以后减半。 3. 在 4℃ 用抽提缓冲液抽提细胞 3~5 分钟。这一步去除组蛋白 H1 和除中间纤维蛋白之外的细胞骨架蛋白。另外，这一步也可在 DNA 酶消化步骤（第 4 步）之后作，这样也

从组织中分离制备细胞核基质/中间纤维支架结构

1. 在 4℃ 将新鲜组织切成 1 mm3 左右的小块。在 4℃，用 Teflon 研杵和 Doume 匀浆器在含 0.5% Tritron X-100 的细胞骨架缓冲液中对切碎的组织进行匀浆，直到没有可见的团块。每克组织用大约 10 ml 缓冲液。含 0.5% Triton X-100 的细胞骨架缓冲液： 10 mmol/L PIPES，pH 6.8 300 mmoI/L 蔗糖 100

细胞核的预先分离

1. 在 4℃ 用 PBS 清洗细胞，用一医用台式离心机低速离心。然后用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液悬浮沉淀。每 107 个细胞用 1 ml 缓冲液。用 0.002 英寸间隙的 Dounce 匀浆器破碎细胞。含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液： 10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4) 10 mmol/L NaCl 1.5 mmo