标记单层培养细胞

HeLa 细胞
FCS 磷酸盐
无磷酸培养基

1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。

2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。

3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 ³²P 磷酸盐至 20 μCi/ml，继续培养 16 小时。

4. 估算同位素的摄取量：

(1) 加入同位素，混匀后立即吸出 5 μl 培养基于一小离心管，冰浴。

(2) 培养结束后再取 5 μl 培养基。

(3) 通过测定温育前后培养基活性差来估算放射活性。

5. 提取并分析 RNA。