用[32P]磷酸标记细胞实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

标记单层培养细胞

1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。 2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。 3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸盐至 20 μCi/ml，继续培养 16 小时。 4. 估算同位素的摄取量： (1) 加入同位素，混匀后立即吸出 5 μl 培养基于一小离心管，冰浴。 (2) 培养结束后

标记悬浮培养的HeLa细胞

1. 培养细胞至对数期，600 g 离心 5 分钟。 2. 弃上清，用无磷酸培养基悬浮细胞。 3. 培养细胞 3~4 小时以耗尽它们的磷酸储备。 4. 再次离心，弃上清，用无磷酸培养基悬浮，加 32P 磷酸盐至 20 μCi/ml 培养液，培养 16 小时。 5. 提取并分析 RNA。