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快速简便的转化法

最新修订时间:

材料与仪器

酵母菌
LiAc
YPAD 平板 YPAD 液体培养基

步骤

1. 将 10 μl 接种物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2,培养过夜。

2. 对一个转化来说,在微量离心管中用 1.0 ml 灭菌水悬浮一接种环酵母菌。

3. 离心沉淀细胞,将水去掉。

4. 用 500 μl 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞,30℃ 水浴 15 分钟。

5. 制备转化混合物:每个转化管加 240 μl PEG、36 μl 1.0 mol/L 的 LiAc、25 μl ssDNA、5.0 μl 质粒 DNA 和 45 μl 水。

6. 用微量离心机离心沉淀细胞,去掉 LiAc。

7. 向每个细胞沉淀中加入 350 μl 转化混合物,剧烈涡旋混匀。

8. 30℃ 水浴 30 分钟。

9. 42℃ 水浴热休克 20 分钟。

10. 用微量离心机最高速度离心 15 秒,去掉转化混合物。

11. 吸取 1.0 ml 灭菌水加到管中,上下吹打并剧烈涡旋以重悬细胞。

12. 吸取 100 μl 样品涂布 SC 减样选择培养基平板,30℃ 培养 2~4 天。

来源:丁香实验

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