原理
化学处理法是将组织细胞间起黏着作用的钙、镁离子置换出来,从而使细胞分散开来。
材料与仪器
胰酶 组织
EDTA
尼龙网
EDTA
尼龙网
步骤
一、试剂的配制
1. 0.2% EDTA 配制:称 EDTA 0.2 g,加入 Hank 液 100 ml,封装高压消毒。置 0~4℃ 保存。
2. 胰酶加 EDTA 配制:胰酶 0.25 g 加 PBS ( pH 7.0) 200 ml,浓度 0.125%,EDTA 0.2 g 加 PBS ( pH 7.0) 100 ml,浓度 0.2%。各取 40 ml 混合,分装置冰箱保存,用时过滤即可使用。
二、实验方法
1. 将组织切成薄片,置入试管中。
2. 首先加入 EDTA 液 5 ml,室温下 0.5 h,离心弃之。
3. 再加入胰酶-EDTA 液 5 ml。在 37℃ 恒温水浴振荡器内 30 min。
4. 用 300 目尼龙网过滤,离心沉淀 1000 r/min,5 min。再以生理盐水洗 2~3 次。
5. 细胞固定或低温保存备用。
1. 0.2% EDTA 配制:称 EDTA 0.2 g,加入 Hank 液 100 ml,封装高压消毒。置 0~4℃ 保存。
2. 胰酶加 EDTA 配制:胰酶 0.25 g 加 PBS ( pH 7.0) 200 ml,浓度 0.125%,EDTA 0.2 g 加 PBS ( pH 7.0) 100 ml,浓度 0.2%。各取 40 ml 混合,分装置冰箱保存,用时过滤即可使用。
二、实验方法
1. 将组织切成薄片,置入试管中。
2. 首先加入 EDTA 液 5 ml,室温下 0.5 h,离心弃之。
3. 再加入胰酶-EDTA 液 5 ml。在 37℃ 恒温水浴振荡器内 30 min。
4. 用 300 目尼龙网过滤,离心沉淀 1000 r/min,5 min。再以生理盐水洗 2~3 次。
5. 细胞固定或低温保存备用。
来源:丁香实验