原理
在标准培养箱（37°C ) 中用 Leighton 塑料管培养细胞，然后用胰蛋白酶悬浮法收集细胞。
材料与仪器
羊水标本 D-PBSA 秋水仙酰胺 胸腺嘧啶核苷 溴脱氧尿核苷 胰蛋白酶 EDTA Histopaque-l077
完全培养液 胰蛋白酶和EDTA混合液 消毒剂如Virkon 氯化钾低渗溶液 固定液 过氧化氢溶液 生理盐水 胰蛋白酶生理盐水 pH6.8的缓冲液 Leishman染液
普通容器 塑料吸管和培养用移液器 塑料Leighton管和盖 注射器 一次性塑料移液吸管或巴斯德吸管 显微载玻片 Copline缸 DPX玻片封固剂和盖玻片 烘箱 加热板 亮视野相差正置显微镜
完全培养液 胰蛋白酶和EDTA混合液 消毒剂如Virkon 氯化钾低渗溶液 固定液 过氧化氢溶液 生理盐水 胰蛋白酶生理盐水 pH6.8的缓冲液 Leishman染液
普通容器 塑料吸管和培养用移液器 塑料Leighton管和盖 注射器 一次性塑料移液吸管或巴斯德吸管 显微载玻片 Copline缸 DPX玻片封固剂和盖玻片 烘箱 加热板 亮视野相差正置显微镜
步骤
试管培养的建立和检测
1. 将约 10~15 ml 羊水用普通塑料无菌容器送到实验室。
2. 用带有无菌塑料混合针的 20 ml 无菌注射器或 10 ml 吸管将样本分入 3 个 Leighton 管中。按病入和详细鉴别资料标记试管。如果样本较少（5 ml 或少于 5 ml )，可用 2 个培养管培养。
3. 离心（150 g，5 min )。
4. 将上清液倒回原来的容器，以供生物化学分析或免疫学分析，例如 α-甲胎蛋白（AFP ) 测定，或者将上清液倒入消毒溶液（Virkon )。
5. 在每个 Leighton 管中用 1 ml 培养液将细胞混悬。
6. 在 37°C 条件下培养 Leighton 管内的细胞。
7. 将细胞静止培养 5~7 天，使细胞贴壁和建立克隆。
8. 评估细胞生长情况。根据细胞的生长程度，添加 0.5 ml 新鲜培养液或除去培养液后加入约 1 ml 新鲜培养液。
9. 此后，按需要每 2~4 天重新评价细胞的生长状况，适当更换培养液，直至有足够细胞收集。通常在培养后 7~12 天收集细胞。如果有可能，在收集细胞的前一天更换培养液。
分散和传代
10. 将每个培养管加入约 1.5 ml 灭菌的 TE 液，预温至 37°C 。
11. 从培养管中弃去培养液，然后用 1 ml 灭菌的 TE 液浸洗 1 次。
12. 分散细胞
(a)将 0.2 ml TE 液加入培养管，在 37°C 条件下孵育 1~2 min，使细胞脱落。
(b)用倒置显微镜检査细胞。当细胞悬浮时，加入 1 ml 培养液，然后将培养管放回培养箱。培养液中的血清可终止 TE 液的作用。
13. 传代
(a)将 0.5 ml TE 液加入培养管，在 37°C 条件下孵育 1~2 min，使细胞脱落。
(b)用倒置显微镜检查细胞。当细胞悬浮时，加入 1.2 ml 培养液，然后将细胞悬液分放入合适数目的继代培养管。可接种 2~8 个培养管，这取决于最初的细胞密度。使每个传代培养管中的细胞密度不等，通常是有价值的。这样，能够有机会以最佳细胞密度收集培养管内的细胞。
(c)在每个传代培养管加入新鲜培养液至 1 ml，然后培养。
14. 第 2 天确认细胞已贴壁，然后更换培养液。
培养管内细胞的常规收集
只要备有其他培养细胞，可在原代细胞进行常规收集。如果只保留 1 个培养管，应在收集细胞前继代培养，或在收集后将细胞传代。
15. 当准备收集细胞时，将 0.1 ml 稀释过的秋水仙酰胺（将 1 ml 秋水仙胺酰加人到 9 ml 无菌 D-PBSA 中，作为工作液。然后，每 1 ml 细胞培养液中加入 0.1 ml 工作液，终浓度达到 0.1 μg/ml）加入到每个培养管中。
16. 有必要将细胞培养足够的时间，以便获得较多呈圆形的有丝分裂细胞。典型的培养时间为 2~3 h ，但很活跃的细胞可少至半小时，缓慢生长的细胞可达 4 h 以上。
17. 将培养液移入 Virkon 溶液，再将培养管在纸巾上倾流片刻。
18. 加入 2 ml TE 液后，在 37°C 条件下将细胞培养 3 min，以便使细胞脱落。
19. 当细胞悬浮时，加入 7 ml 氯化钾低渗溶液（0.075 mol/L KCl，用 UPW 配制。将 5.574 g Analair 氯化钾加入 1 L 超纯水中
），在 37°C 条件下将细胞放置 5 min。
20. 离心（150 g，5 min )。
21. 小心地将上清液倒入 Virkon 溶液中，然后将培养管在纸巾上倾流片刻。轻弹培养管，使细胞在剩余的少量培养液中悬浮。
22. 用新鲜固定液（新鲜配制，将 3 份 Analar 甲醇和 1 份 Analar 冰乙酸混合）缓慢固定细胞
(a)轻弹培养管后，滴入 1~2 ml 固定液。不断摇晃细胞，以免细胞成簇。
(b)加入 3~4 ml 固定液。
23. 离心（150 g，5 min )。
24. 将上清固定液倒入碳酸氢钠溶液中。
25. 轻轻混悬细胞后，加入 5 ml 固定液。
26. 通过离心、倒掉上清固定液和再固定，更换固定液，即重复操作步骤 9~11。
27. 将细胞离心后，倒掉上清液，用剩余的固定液混悬细胞，制备细胞涂片 (见后述的玻片制备步骤）。
胸腺嘧啶核苷同步化收集
1. 在收集细胞的前一天早上，用添加胸腺嘧啶核苷（用 D-PBSA 制备 15 mg/ml 储备液，过滤除菌。将 0.1 ml 胸腺嘧啶核苷储备液加入到 10 ml 培养液中。在收集细胞前更换使用胸腺嘧啶核苷培养液。在培养液中的终浓度应为 0.15 mg/ml）的培养液换液（胸腺嘧啶核苷的终浓度为 0.15 mg/ml )。
2. 收集细胞当天的早些时候，用预温的培养液浸洗去除胸腺嘧啶核苷。然后，倒掉培养液，将细胞浸洗两次。加入 1 ml 不含胸腺嘧啶核苷的培养液，这种培养液可缓解胸腺嘧啶核苷的阻断作用。缓解时间取决于计划收集细胞的时间。
3. 将细胞培养 4 h ，然后加入 0.1 ml 稀释的秋水仙酰胺。
4. 将细胞继续培养 2 h ，然后按照培养管常规收集法收集细胞（按照本方案前述的培养管内细胞的常规收集，从操作步骤 2 开始）。
溴脱氧尿核苷秋水仙酰胺过夜收集
1. 在收集的前一天早上更换培养液。
2. 同天下午在每 1 ml 培养液中加入 0.1ml BUdR-秋水仙酰胺液（BUdR 的终浓度为 25 μg/ml，秋水仙酰胺为 0.04 μg/ml )。
3. 次日早上（处理约 20 h 后），将 BUdR-秋水仙酰胺液倒入含有金精石的可密封容器中。然后，将 2 ml 预温的 TE 液加入培养管，孵育 3 min，使细胞脱落。
4. 检査到细胞已悬浮时，加入 7 ml 0.075 mol/L KCl 低渗溶液。将细胞培养 5 min。
5. 离心（150 g，5 min )。
6. 将低渗上清液倒入金精石容器中。
7. 轻轻混悬细胞，按本方案前述的培养管内细胞常规收集，从操作步骤 6 开始缓慢固定细胞和继续收集。
制备玻片
1. 使用清洁的玻片。可以购买预清洁的玻片。使用前在每张玻片上加 1 滴新鲜固定液，立即用纸巾擦净，这有助于清洁玻片。如能够控制周围的环境，应在 20~25°C 和 40%~50% 相对湿度的环境下制备玻片。
2. 从 1~3 cm 的高度将 1 滴细胞悬液滴加在每张玻片上。使液滴自然晾干。
3. 用相差显微镜确定分散质量。如果分散满意，可制备其余的玻片。如有必要，在细胞悬液中再加入少量固定液，调整细胞密度。
4. 在某些情况下，需改进分散方法，以下的建议可能是有帮助的。
(a)先在玻片上吹一口气，然后从 1~3 cm 的高度将 1 滴细胞悬液滴加在玻片上。使液滴自然晾干。
(b)无论在玻片上吹气或不吹气，将 1 滴细胞悬液加在玻片上。放置几秒钟后，在液滴尚未干燥前，再加滴 1 滴新鲜固定液。然后，使玻片晾干。
(c)不管在玻片上吹气或不吹气，将 1 滴细胞悬液加在玻片上。放置几秒钟。当干燥的表面凹陷或可见 Newton 环时，将 1 滴新鲜固定液加在上面。使玻片晾干。
(d)如果分散质量还不满意，将固定的细胞悬液放在冰箱中固定过夜。第 2 天再制备玻片。
用胰蛋白酶进行 G 带显带
1. 可在胰蛋白酶（将 10 ml 超纯水加入小瓶中，按照产品使用说明配制 5% (w / v ) 胰蛋白酶液）消化前预处理玻片，但依据玻片的制备后时间也可不作处理。新鲜制备的玻片用过氧化氢预处理效果好，而制备时间较长的玻片用浓 Hank’s 盐溶液预处理效果好。Coplin 缸是合适的染色器皿。也可以使用未作预处理的玻片。
2. 可采用以下的预处理方法。
(a)用 5 % 过氧化氢将新鲜制备的玻片（晾干后 1 h ) 浸泡 20 s~2 min 。
(b)用 60°C 烘箱将新鲜制备的玻片烘烤数小时或过夜，使玻片老化。然后，在 5×HBSS 中将玻片浸泡 5 min。
(c)在 pH 6.8 的缓冲液中将制备后 1 天或较长时间的玻片浸泡 60 s。
3. 用 pH 6.8 的缓冲液将玻片充分浸洗。
4. 用盐溶液配制的 0.14% 胰蛋内酶浸泡玻片 3 s~2 min。
5. 用 pH 6.8 的缓冲液将玻片充分浸洗。
6. 染色前用 pH 6.8 的缓冲液稀释 Leishman 染液（1 : 4 ) （通常用 4 份 pH 6.8 的缓冲液稀释 1 份 Leishman 染液）， 然后将玻片染色 4 min。
7. 用自来水冲洗玻片，然后引流掉或小心吸干水分。
8. 在 400× 亮视野显微镜下分析显带结果。如果显带较暗，可用 pH 6.8 的缓冲液或甲醇脱色，并可重复操作。如果显带过度，用另外的玻片，采用不同的胰蛋白酶处理时间或改变预处理方法，重新操作。
9. 将玻片在热盘上 ( 75°C ) 放置数秒钟，以保证玻片完全干燥。然后，用 DPX 和盖玻片封片。
染色体制图在本章后面叙述（见方案 27. 9)。
1. 将约 10~15 ml 羊水用普通塑料无菌容器送到实验室。
2. 用带有无菌塑料混合针的 20 ml 无菌注射器或 10 ml 吸管将样本分入 3 个 Leighton 管中。按病入和详细鉴别资料标记试管。如果样本较少（5 ml 或少于 5 ml )，可用 2 个培养管培养。
3. 离心（150 g，5 min )。
4. 将上清液倒回原来的容器，以供生物化学分析或免疫学分析，例如 α-甲胎蛋白（AFP ) 测定，或者将上清液倒入消毒溶液（Virkon )。
5. 在每个 Leighton 管中用 1 ml 培养液将细胞混悬。
6. 在 37°C 条件下培养 Leighton 管内的细胞。
7. 将细胞静止培养 5~7 天，使细胞贴壁和建立克隆。
8. 评估细胞生长情况。根据细胞的生长程度，添加 0.5 ml 新鲜培养液或除去培养液后加入约 1 ml 新鲜培养液。
9. 此后，按需要每 2~4 天重新评价细胞的生长状况，适当更换培养液，直至有足够细胞收集。通常在培养后 7~12 天收集细胞。如果有可能，在收集细胞的前一天更换培养液。
分散和传代
10. 将每个培养管加入约 1.5 ml 灭菌的 TE 液，预温至 37°C 。
11. 从培养管中弃去培养液，然后用 1 ml 灭菌的 TE 液浸洗 1 次。
12. 分散细胞
(a)将 0.2 ml TE 液加入培养管，在 37°C 条件下孵育 1~2 min，使细胞脱落。
(b)用倒置显微镜检査细胞。当细胞悬浮时，加入 1 ml 培养液，然后将培养管放回培养箱。培养液中的血清可终止 TE 液的作用。
13. 传代
(a)将 0.5 ml TE 液加入培养管，在 37°C 条件下孵育 1~2 min，使细胞脱落。
(b)用倒置显微镜检查细胞。当细胞悬浮时，加入 1.2 ml 培养液，然后将细胞悬液分放入合适数目的继代培养管。可接种 2~8 个培养管，这取决于最初的细胞密度。使每个传代培养管中的细胞密度不等，通常是有价值的。这样，能够有机会以最佳细胞密度收集培养管内的细胞。
(c)在每个传代培养管加入新鲜培养液至 1 ml，然后培养。
14. 第 2 天确认细胞已贴壁，然后更换培养液。
培养管内细胞的常规收集
只要备有其他培养细胞，可在原代细胞进行常规收集。如果只保留 1 个培养管，应在收集细胞前继代培养，或在收集后将细胞传代。
15. 当准备收集细胞时，将 0.1 ml 稀释过的秋水仙酰胺（将 1 ml 秋水仙胺酰加人到 9 ml 无菌 D-PBSA 中，作为工作液。然后，每 1 ml 细胞培养液中加入 0.1 ml 工作液，终浓度达到 0.1 μg/ml）加入到每个培养管中。
16. 有必要将细胞培养足够的时间，以便获得较多呈圆形的有丝分裂细胞。典型的培养时间为 2~3 h ，但很活跃的细胞可少至半小时，缓慢生长的细胞可达 4 h 以上。
17. 将培养液移入 Virkon 溶液，再将培养管在纸巾上倾流片刻。
18. 加入 2 ml TE 液后，在 37°C 条件下将细胞培养 3 min，以便使细胞脱落。
19. 当细胞悬浮时，加入 7 ml 氯化钾低渗溶液（0.075 mol/L KCl，用 UPW 配制。将 5.574 g Analair 氯化钾加入 1 L 超纯水中
），在 37°C 条件下将细胞放置 5 min。
20. 离心（150 g，5 min )。
21. 小心地将上清液倒入 Virkon 溶液中，然后将培养管在纸巾上倾流片刻。轻弹培养管，使细胞在剩余的少量培养液中悬浮。
22. 用新鲜固定液（新鲜配制，将 3 份 Analar 甲醇和 1 份 Analar 冰乙酸混合）缓慢固定细胞
(a)轻弹培养管后，滴入 1~2 ml 固定液。不断摇晃细胞，以免细胞成簇。
(b)加入 3~4 ml 固定液。
23. 离心（150 g，5 min )。
24. 将上清固定液倒入碳酸氢钠溶液中。
25. 轻轻混悬细胞后，加入 5 ml 固定液。
26. 通过离心、倒掉上清固定液和再固定，更换固定液，即重复操作步骤 9~11。
27. 将细胞离心后，倒掉上清液，用剩余的固定液混悬细胞，制备细胞涂片 (见后述的玻片制备步骤）。
胸腺嘧啶核苷同步化收集
1. 在收集细胞的前一天早上，用添加胸腺嘧啶核苷（用 D-PBSA 制备 15 mg/ml 储备液，过滤除菌。将 0.1 ml 胸腺嘧啶核苷储备液加入到 10 ml 培养液中。在收集细胞前更换使用胸腺嘧啶核苷培养液。在培养液中的终浓度应为 0.15 mg/ml）的培养液换液（胸腺嘧啶核苷的终浓度为 0.15 mg/ml )。
2. 收集细胞当天的早些时候，用预温的培养液浸洗去除胸腺嘧啶核苷。然后，倒掉培养液，将细胞浸洗两次。加入 1 ml 不含胸腺嘧啶核苷的培养液，这种培养液可缓解胸腺嘧啶核苷的阻断作用。缓解时间取决于计划收集细胞的时间。
3. 将细胞培养 4 h ，然后加入 0.1 ml 稀释的秋水仙酰胺。
4. 将细胞继续培养 2 h ，然后按照培养管常规收集法收集细胞（按照本方案前述的培养管内细胞的常规收集，从操作步骤 2 开始）。
溴脱氧尿核苷秋水仙酰胺过夜收集
1. 在收集的前一天早上更换培养液。
2. 同天下午在每 1 ml 培养液中加入 0.1ml BUdR-秋水仙酰胺液（BUdR 的终浓度为 25 μg/ml，秋水仙酰胺为 0.04 μg/ml )。
3. 次日早上（处理约 20 h 后），将 BUdR-秋水仙酰胺液倒入含有金精石的可密封容器中。然后，将 2 ml 预温的 TE 液加入培养管，孵育 3 min，使细胞脱落。
4. 检査到细胞已悬浮时，加入 7 ml 0.075 mol/L KCl 低渗溶液。将细胞培养 5 min。
5. 离心（150 g，5 min )。
6. 将低渗上清液倒入金精石容器中。
7. 轻轻混悬细胞，按本方案前述的培养管内细胞常规收集，从操作步骤 6 开始缓慢固定细胞和继续收集。
制备玻片
1. 使用清洁的玻片。可以购买预清洁的玻片。使用前在每张玻片上加 1 滴新鲜固定液，立即用纸巾擦净，这有助于清洁玻片。如能够控制周围的环境，应在 20~25°C 和 40%~50% 相对湿度的环境下制备玻片。
2. 从 1~3 cm 的高度将 1 滴细胞悬液滴加在每张玻片上。使液滴自然晾干。
3. 用相差显微镜确定分散质量。如果分散满意，可制备其余的玻片。如有必要，在细胞悬液中再加入少量固定液，调整细胞密度。
4. 在某些情况下，需改进分散方法，以下的建议可能是有帮助的。
(a)先在玻片上吹一口气，然后从 1~3 cm 的高度将 1 滴细胞悬液滴加在玻片上。使液滴自然晾干。
(b)无论在玻片上吹气或不吹气，将 1 滴细胞悬液加在玻片上。放置几秒钟后，在液滴尚未干燥前，再加滴 1 滴新鲜固定液。然后，使玻片晾干。
(c)不管在玻片上吹气或不吹气，将 1 滴细胞悬液加在玻片上。放置几秒钟。当干燥的表面凹陷或可见 Newton 环时，将 1 滴新鲜固定液加在上面。使玻片晾干。
(d)如果分散质量还不满意，将固定的细胞悬液放在冰箱中固定过夜。第 2 天再制备玻片。
用胰蛋白酶进行 G 带显带
1. 可在胰蛋白酶（将 10 ml 超纯水加入小瓶中，按照产品使用说明配制 5% (w / v ) 胰蛋白酶液）消化前预处理玻片，但依据玻片的制备后时间也可不作处理。新鲜制备的玻片用过氧化氢预处理效果好，而制备时间较长的玻片用浓 Hank’s 盐溶液预处理效果好。Coplin 缸是合适的染色器皿。也可以使用未作预处理的玻片。
2. 可采用以下的预处理方法。
(a)用 5 % 过氧化氢将新鲜制备的玻片（晾干后 1 h ) 浸泡 20 s~2 min 。
(b)用 60°C 烘箱将新鲜制备的玻片烘烤数小时或过夜，使玻片老化。然后，在 5×HBSS 中将玻片浸泡 5 min。
(c)在 pH 6.8 的缓冲液中将制备后 1 天或较长时间的玻片浸泡 60 s。
3. 用 pH 6.8 的缓冲液将玻片充分浸洗。
4. 用盐溶液配制的 0.14% 胰蛋内酶浸泡玻片 3 s~2 min。
5. 用 pH 6.8 的缓冲液将玻片充分浸洗。
6. 染色前用 pH 6.8 的缓冲液稀释 Leishman 染液（1 : 4 ) （通常用 4 份 pH 6.8 的缓冲液稀释 1 份 Leishman 染液）， 然后将玻片染色 4 min。
7. 用自来水冲洗玻片，然后引流掉或小心吸干水分。
8. 在 400× 亮视野显微镜下分析显带结果。如果显带较暗，可用 pH 6.8 的缓冲液或甲醇脱色，并可重复操作。如果显带过度，用另外的玻片，采用不同的胰蛋白酶处理时间或改变预处理方法，重新操作。
9. 将玻片在热盘上 ( 75°C ) 放置数秒钟，以保证玻片完全干燥。然后，用 DPX 和盖玻片封片。
染色体制图在本章后面叙述（见方案 27. 9)。
注意事项
1. 安全提示
(a)戴手套和穿实验衣。所有样本都应在 Ⅱ 级微生物安全柜中的无菌条件下处理。
(b)应将丢弃的培养液和低渗上清液（但不是固定液）倒入消毒溶液中，如 Virkon 或次氯酸盐。固定液应倒入碳酸氢钠溶液中，以便使酸中和。2 h 后，将这两种废液倒入有充足流水的排水系统。
(c)溴脱氧尿核苷（BUdR ) 是一种已知的诱变剂，可选择使用。在从事涉及这种化学制削的任何工作前，应当承诺适当的当地安全评价（如 COSHH )。可将含有过量化学物质的溶液和上清液倒入盛有金精石或类似吸收物质的可密封容器中，然后焚化处理。
(d)固定和准备玻片时使用甲醇和乙酸的操作应在烟雾通风橱中进行。
2. 注意事项
(a)通过用胰蛋白酶分散细胞克隆能促进细胞的快速生长（见下面的分散和传代方法）。如果需要大量的细胞，将细胞传到几个 Leighton 管或培养瓶，以有利于细胞生长，获得较多细胞。
(b)血染羊水样本的细胞生长不如清澈样本好。处理这种样本的一种方法是利用密度梯度离心（如 Histopaque ) 将羊膜细胞与污染的红细胞分离。
(c)如果不先吸去血染的培养液，在 6~7 天评估严重血染样本的细胞生长情况通常是不可能的。可将培养液收集入另外的试管中。如果原有试管的细胞能够生长， 可将收集的培养液丢弃。如果需要， 也可将收集的培养液进一步培养。
(d)无论如何不希望丢弃原来的细胞悬液时，在第 1 次换液时可增加试管培养。
3. 注意事项
(a)可在 -20°C 条件下储存不同固定阶段的固定细胞悬液。在制备玻片前换固定液 2 次。
(b)当选择传代或只剩下 1 个培养管时，可采用保留收集法。这种方法需要在收集的开始阶段加入无菌的秋水仙酰胺和 TE 液。在细胞脱落后，加入低渗溶液前，将细胞移入另 1 个离心管。在原始培养管中加入新鲜培养液。第 2 天当细胞贴壁后应更换培养液，以便除去残留的胰蛋白酶和秋水仙酰胺。
(c)如果收集的细胞中的分裂中期细胞过少，可选择使用以下方法：
(i)将细胞传到培养瓶中。当细胞附着时，将培养瓶与水平面保持轻微的角度。用这种方法斜置培养瓶能使前缘细胞横跨整个培养瓶的宽度，前缘细胞的生长速度总是很快。
(ii)用低浓度的秋水仙酰胺处理细胞过夜。
(d)可通过胸腺嘧啶核苷同步化或在有溴脱氧尿核苷的条件下经秋水仙酰胺过夜处理，产生用于高分辨分析的较长染色体。然而，这两种方法对于指数生长期细胞的效果很有效，并需要对细胞生长作出细致评价。
(a)戴手套和穿实验衣。所有样本都应在 Ⅱ 级微生物安全柜中的无菌条件下处理。
(b)应将丢弃的培养液和低渗上清液（但不是固定液）倒入消毒溶液中，如 Virkon 或次氯酸盐。固定液应倒入碳酸氢钠溶液中，以便使酸中和。2 h 后，将这两种废液倒入有充足流水的排水系统。
(c)溴脱氧尿核苷（BUdR ) 是一种已知的诱变剂，可选择使用。在从事涉及这种化学制削的任何工作前，应当承诺适当的当地安全评价（如 COSHH )。可将含有过量化学物质的溶液和上清液倒入盛有金精石或类似吸收物质的可密封容器中，然后焚化处理。
(d)固定和准备玻片时使用甲醇和乙酸的操作应在烟雾通风橱中进行。
2. 注意事项
(a)通过用胰蛋白酶分散细胞克隆能促进细胞的快速生长（见下面的分散和传代方法）。如果需要大量的细胞，将细胞传到几个 Leighton 管或培养瓶，以有利于细胞生长，获得较多细胞。
(b)血染羊水样本的细胞生长不如清澈样本好。处理这种样本的一种方法是利用密度梯度离心（如 Histopaque ) 将羊膜细胞与污染的红细胞分离。
(c)如果不先吸去血染的培养液，在 6~7 天评估严重血染样本的细胞生长情况通常是不可能的。可将培养液收集入另外的试管中。如果原有试管的细胞能够生长， 可将收集的培养液丢弃。如果需要， 也可将收集的培养液进一步培养。
(d)无论如何不希望丢弃原来的细胞悬液时，在第 1 次换液时可增加试管培养。
3. 注意事项
(a)可在 -20°C 条件下储存不同固定阶段的固定细胞悬液。在制备玻片前换固定液 2 次。
(b)当选择传代或只剩下 1 个培养管时，可采用保留收集法。这种方法需要在收集的开始阶段加入无菌的秋水仙酰胺和 TE 液。在细胞脱落后，加入低渗溶液前，将细胞移入另 1 个离心管。在原始培养管中加入新鲜培养液。第 2 天当细胞贴壁后应更换培养液，以便除去残留的胰蛋白酶和秋水仙酰胺。
(c)如果收集的细胞中的分裂中期细胞过少，可选择使用以下方法：
(i)将细胞传到培养瓶中。当细胞附着时，将培养瓶与水平面保持轻微的角度。用这种方法斜置培养瓶能使前缘细胞横跨整个培养瓶的宽度，前缘细胞的生长速度总是很快。
(ii)用低浓度的秋水仙酰胺处理细胞过夜。
(d)可通过胸腺嘧啶核苷同步化或在有溴脱氧尿核苷的条件下经秋水仙酰胺过夜处理，产生用于高分辨分析的较长染色体。然而，这两种方法对于指数生长期细胞的效果很有效，并需要对细胞生长作出细致评价。
来源：丁香实验
