原理
在过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶竭色4-邻甲氧基苯酚,在470nm波长处测定生成物的吸光度(A)值,即可求出该酶活性。
材料与仪器
植物叶片
磷酸缓冲液 愈创木酚
分光光度计 离心机 离心管 研钵 移液管 移液管架 试管 试管架 洗耳球
磷酸缓冲液 愈创木酚
分光光度计 离心机 离心管 研钵 移液管 移液管架 试管 试管架 洗耳球
步骤
一、材料、仪器设备及试剂
1. 材料:植物叶片
2. 仪器设备:分光光度计,离心机,离心管,研钵,移液管,移液管架,试管,试管架,洗耳球。
3. 试剂及配制:
0.1mol·L-1磷酸缓冲液(pH7)。
反应液(100 ml 0.1mol·L-1磷酸缓冲液(pH6)中加入0.5 ml 愈创木酚、1 ml 30﹪H2O2,充分摇匀)。
二、实验步骤
1. 酶液提取
称取植物叶片1g,剪碎置于已冷冻过的研钵中,加入少量石英砂,分两次加入总量为10 ml
pH7磷酸缓冲液,研磨成匀浆后,倒入离心管中,在8000 r / min离心15min,上清液即为粗酶提取液,倒入小试管低温下放置备用。
2. 酶活性测定
吸取反应液3 ml 于试管中,加入酶提取液0.02 ml(视酶活性可增减加入量),迅速摇匀后倒入光径1cm的比色杯中,以未加酶液之反应液为空白对照,在470nm波长处,以时间扫描方式,测定3min内吸光度值变化,取线性变化部分,计算每分钟吸光度变化值(△A470)。
三、酶活性计算
按下式计算酶的相对活性
1. 材料:植物叶片
2. 仪器设备:分光光度计,离心机,离心管,研钵,移液管,移液管架,试管,试管架,洗耳球。
3. 试剂及配制:
0.1mol·L-1磷酸缓冲液(pH7)。
反应液(100 ml 0.1mol·L-1磷酸缓冲液(pH6)中加入0.5 ml 愈创木酚、1 ml 30﹪H2O2,充分摇匀)。
二、实验步骤
1. 酶液提取
称取植物叶片1g,剪碎置于已冷冻过的研钵中,加入少量石英砂,分两次加入总量为10 ml
pH7磷酸缓冲液,研磨成匀浆后,倒入离心管中,在8000 r / min离心15min,上清液即为粗酶提取液,倒入小试管低温下放置备用。
2. 酶活性测定
吸取反应液3 ml 于试管中,加入酶提取液0.02 ml(视酶活性可增减加入量),迅速摇匀后倒入光径1cm的比色杯中,以未加酶液之反应液为空白对照,在470nm波长处,以时间扫描方式,测定3min内吸光度值变化,取线性变化部分,计算每分钟吸光度变化值(△A470)。
三、酶活性计算
按下式计算酶的相对活性
来源:丁香实验