原理
内皮细胞易于从血管分离进行培养成单层细胞，对研究内皮细胞再生生、肿瘤促血管生长因子（TAF）等有很大应用价值。人内皮细胞培养可应用人脐带脐静脉、动物大动脉等，用灌流消化法获取细胞最为简便。
材料与仪器
脐带
胶原酶 消化液 PBS
注射器 离心管 培养基
胶原酶 消化液 PBS
注射器 离心管 培养基
步骤
1. 取产后的新鲜脐带；如不立即培养可保存于4 ℃中，但不宜超过12 小时；无菌剪取长10~15 厘米一段。其它如胚胎和幼体动物的大血管，亦可用于培养；
2. 先用三通注射器吸温PBS液注入脐带的脐静脉中，洗除残血；注入口处宜用线绳结扎，以防液体返流；
3. 用血管钳夹紧脐带一端，从另端向脐静脉中徐徐注入最终浓度为0.1 %的胶原酶，待末端出现液体后结扎之，令充满血管，注入口应应结扎，以防液体返流，消化3~10 分钟；
4. 吸出含有内皮细胞的消化液，注入离心管中；为获取更多细胞，可再注入温PBS冲洗2~3 次彻底清除干净残余细胞，一并注入离心管中离心；
5. 吸除上清，加1640培养液，制成细胞悬液，接种入瓶皿中培养，顺利时2~3 天内细胞即可长成单层。
2. 先用三通注射器吸温PBS液注入脐带的脐静脉中，洗除残血；注入口处宜用线绳结扎，以防液体返流；
3. 用血管钳夹紧脐带一端，从另端向脐静脉中徐徐注入最终浓度为0.1 %的胶原酶，待末端出现液体后结扎之，令充满血管，注入口应应结扎，以防液体返流，消化3~10 分钟；
4. 吸出含有内皮细胞的消化液，注入离心管中；为获取更多细胞，可再注入温PBS冲洗2~3 次彻底清除干净残余细胞，一并注入离心管中离心；
5. 吸除上清，加1640培养液，制成细胞悬液，接种入瓶皿中培养，顺利时2~3 天内细胞即可长成单层。
常见问题
一、讨论
内皮细胞生长后，开始细胞成梭形，类成纤维细胞，连接成片后始显内皮细胞形状。
首次用胶原酶消化时，应做预试验，以找出最佳消化时间，以防止消化不足细胞未脱落，也避免因消化过度使内皮细胞底层成纤维细胞混入。我们曾试用胰蛋白酶消化，效果远不如胶原酶好。
人脐带易于获得，培养效果好；细胞生生后，一般传6~7 代后即衰退，难以长期维持。
用兔血管内皮细胞培养较好，可传10~30 代；不同部位血管内皮细胞生物学性状不同，对各种作用因素反应亦有很大差别。
内皮细胞生长后，开始细胞成梭形，类成纤维细胞，连接成片后始显内皮细胞形状。
首次用胶原酶消化时，应做预试验，以找出最佳消化时间，以防止消化不足细胞未脱落，也避免因消化过度使内皮细胞底层成纤维细胞混入。我们曾试用胰蛋白酶消化，效果远不如胶原酶好。
人脐带易于获得，培养效果好；细胞生生后，一般传6~7 代后即衰退，难以长期维持。
用兔血管内皮细胞培养较好，可传10~30 代；不同部位血管内皮细胞生物学性状不同，对各种作用因素反应亦有很大差别。
来源：丁香实验
