材料与仪器
NaHCO3 HEPES
步骤
一、NaHCO3液
1. 常用的浓度有7.4%、5.6%、3.7%三种,配制时,用三蒸馏水溶解后,过滤除菌,分装小瓶,盖紧瓶塞,4 ℃冰箱或室温下保存。
2. 或用10 磅10 分钟高压蒸气灭菌亦可;可能有部分NaHCO3被破坏,但操作简单方便。
3. 消毒后要迅速封上瓶口,以免CO2逸出。
4. 调节溶液pH时,NaHCO3液要逐滴加入,并不时搅动培养液,以防加入过量,使pH值过度增高;如溶液内含有酚红指示剂,可按颜色变化判定。当pH值超过后,可用高压灭菌的10%醋酸溶液或通入CO2气体方法调节。
二、HEPES液
HEPES可按照所需的浓度,直接加入到配制的培养液内,再过滤除菌,通常配制成500 mM的浓度
1. 用200 ml双蒸水溶解47.6 克HEPES,用1 N NaOH调节pH 至7.5—8.0;
2. 过滤除菌后,分装小瓶,室温或4℃保存。
HEPES的使用,由于细胞的代谢作用,培养液很快变酸成黄色,pH 值下降。另一方面,在细胞接种量少,生长缓慢时,pH值要上升。这些对细胞的生长都不利,可以及时更换培养液,但培养基中营养并未耗尽,因此只调pH即可。调pH除用NaHCO3外亦可用氢离子缓冲剂,它们具有能较长时间控制恒定的pH值的作用,HEPES就是其中的一种。HEPES具有较强的缓冲能力;使用最终浓度一般为10—50 mM,可以根据缓冲能力的要求而定。
1. 常用的浓度有7.4%、5.6%、3.7%三种,配制时,用三蒸馏水溶解后,过滤除菌,分装小瓶,盖紧瓶塞,4 ℃冰箱或室温下保存。
2. 或用10 磅10 分钟高压蒸气灭菌亦可;可能有部分NaHCO3被破坏,但操作简单方便。
3. 消毒后要迅速封上瓶口,以免CO2逸出。
4. 调节溶液pH时,NaHCO3液要逐滴加入,并不时搅动培养液,以防加入过量,使pH值过度增高;如溶液内含有酚红指示剂,可按颜色变化判定。当pH值超过后,可用高压灭菌的10%醋酸溶液或通入CO2气体方法调节。
二、HEPES液
HEPES可按照所需的浓度,直接加入到配制的培养液内,再过滤除菌,通常配制成500 mM的浓度
1. 用200 ml双蒸水溶解47.6 克HEPES,用1 N NaOH调节pH 至7.5—8.0;
2. 过滤除菌后,分装小瓶,室温或4℃保存。
HEPES的使用,由于细胞的代谢作用,培养液很快变酸成黄色,pH 值下降。另一方面,在细胞接种量少,生长缓慢时,pH值要上升。这些对细胞的生长都不利,可以及时更换培养液,但培养基中营养并未耗尽,因此只调pH即可。调pH除用NaHCO3外亦可用氢离子缓冲剂,它们具有能较长时间控制恒定的pH值的作用,HEPES就是其中的一种。HEPES具有较强的缓冲能力;使用最终浓度一般为10—50 mM,可以根据缓冲能力的要求而定。
来源:丁香实验