胶体金pH值的调整
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胶体金与蛋白质的结合成功与否,取决于pH值,一般只有在蛋白质等电点(p
I
)略偏碱的条件下,二者才能牢固地结合,因此,标记之前须将胶体金溶液的pH值调至标记蛋白质的等电点略偏碱。一般可用0.1mol/LK
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CO
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或0.1mol/L HCl调高或调低pH值。由于金溶胶会损害pH计探头,故采用pH
试纸
测定pH值。几种常用的蛋白质标记时,胶体金所用pH值见表。
胶体金合成中各种蛋白、酶的等电点
胶体金合成中各种蛋白、酶的等电点
蛋白 | pH |
IgG | 9.0 |
F(ab) 2 | 7.2 |
McAb | 8.2 |
SPA | 5.7-6.2 |
HRP | 7.2-8.0 |
BSA | 5.2-5.5 |
胰岛素—BSA结合物 | 0.6 |
亲和层析IgG | 7.6 |
大豆凝集素 | 6.1 |
DNA酶 | 6.0 |
RNA酶 | 9.0-9.2 |
低密度脂蛋白 | 5.5 |
亲和素 | 10.0-10.6 |
链霉亲和素 | 6.4-6.8 |
凝集素(Lectin)I | 8.0 |
α—球蛋白 | 6.0 |
霍乱毒素 | 6.9 |
破伤风毒素 | 6.9 |