合作专家 | 孙齐博士
生理学 首都医科大学
原理
用人结肠癌细胞为免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人结肠癌细胞表面抗原（Ag）的单克隆抗体 IgG（第一抗体），二者可以发生特异性的抗原抗体反应，形成抗原抗体复合物，再加入市售（也可自制）的荧光标记的羊抗鼠 IgG 抗体（第二抗体），可以与复合物进一步发生抗原抗体反应（二次抗体反应），这样就可以在光显微镜下观察到这种抗原在结肠癌细胞表面的存在。
材料与仪器
HeLa 细胞，1640 培养液，小牛血清，甲醛固定液，PBS，液体石蜡，盖片，载片，培养瓶，培养皿，滤纸，镊子，吸管，倒置显微镜，荧光显微镜，微量加样器
步骤
1. 将培养瓶中的结肠癌细胞接种到装有盖片的培养皿中，培养 2~3天 。
2. 在倒置镜下观察到盖片上的细胞生长状态良好后，在盖片左上角用玻璃笔做一下标记，以免在以后的操作中正反面颠倒。
3. 将盖片放在甲醛固定液中，4 ℃ 固定 5~10 分钟。
4. 用 PBS 洗三次，注意不要将PBS液直接倒在盖片的细胞面，以免引起细胞大量丢失。用滤纸片将盖片上的 PBS 轻轻吸干，不要损伤细胞层。
5. 将已稀释好的小鼠抗体滴在盖片上．每个盖片 50 μl，37 ℃ 温育 30 分钟。
6. 用 PBS 洗三次，滤纸吸干。
7. 将已稀释好的荧光标记羊抗鼠二次抗体 5 μl 滴加在盖片上，37 ℃ 温育 30 分钟。
8. 用PBS洗三次，滤纸吸干。
9. 将载片上滴一滴液体石蜡。然后将盖片细胞面朝下放到载玻片上，在荧光显微镜下观察。
来源：丁香实验
