材料与仪器
融合蛋白
SDS CaCl2 重组牛肠激酶
水浴锅 培养箱 离心机
SDS CaCl2 重组牛肠激酶
水浴锅 培养箱 离心机
步骤
1. 做预试验监测肠激酶与融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率，准备5个反应体系：
（1）反应1至4：20 μl 融合蛋白；0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK，加50 mmol/l Tris·Cl（pH8.0）/1 mmol/l CaCl2至总体积30 μl。
（2）反应 5：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白，10 μl 50 mmol/l Tris·Cl（pH8.0）/1 mmol/l CaCl2（模拟消化）。
（3）样品于37℃温育16 h。
（3）样品于37℃温育16 h。
2. 在每个样品中加入30 μl 2×SDS样品缓冲液以终止反应，煮沸10 min。
3. 每个样品取10 μl 加样于SDS-聚丙烯酰胺凝胶上分析它们的裂解程度。调整肠激酶浓度和温育时间以得完全消化。
4. 按比例扩大反应，消化更大量的融合蛋白。
4. 按比例扩大反应，消化更大量的融合蛋白。
来源：丁香实验
