材料与仪器
融合蛋白
SDS 钠盐 凝血酶裂解液 凝血酶
水浴锅 培养箱 离心机
SDS 钠盐 凝血酶裂解液 凝血酶
水浴锅 培养箱 离心机
步骤
1. 准备两个小量预试验以确定最佳裂解反应条件：
（1）反应1：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（在合适的缓冲液中）及0.2 μg 凝血酶。
（2）反应2：5 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（模拟消化），25℃下温育反应。
（2）反应2：5 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（模拟消化），25℃下温育反应。
2. 在30 min、1 h、2 h 和4 h 等时刻从反应1中分别取出5 μl 反应液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混匀，-20℃冷冻。
3. 在4 h，往反应2（摸拟消化）中加入5 μl 2×SDS样品缓冲液。
4. 将5 μl 原始的融合蛋白溶液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混匀。
5. 将所有样品煮沸10 min，加样于SDS-聚丙烯酰氨凝胶上分析样品的稳定性以及裂解的效率。
5. 将所有样品煮沸10 min，加样于SDS-聚丙烯酰氨凝胶上分析样品的稳定性以及裂解的效率。
6. 采用试验所得的最佳融合蛋白裂解条件，按比例任意扩大蛋白裂解反应。
来源：丁香实验
