材料与仪器
融合蛋白
SDS
水浴锅 培养箱 离心机
SDS
水浴锅 培养箱 离心机
步骤
1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间：
（1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应
（2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（模拟消化），室温下反应。
（2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（模拟消化），室温下反应。
2. 分别在2、4、8和24 h取出5 μl 反应液，加2×SDS样品缓冲液5 μl，-20℃下冻存。
3. 在24 h 时，将5 μl 反应2（模拟消化）液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混合。
4. 将5 μl 原始融合蛋白溶液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混合。
3. 在24 h 时，将5 μl 反应2（模拟消化）液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混合。
4. 将5 μl 原始融合蛋白溶液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混合。
5. 将所有样品于沸水浴中加热10 min，加样到SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，根据裂解程度确定适当的温育时间。
6. 确定了适当的裂解条件后，将余下的融合蛋白样本按比例扩大反应，仅留小量的未裂解融合蛋白作对照用。以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳监测裂解程度。
来源：丁香实验
