备选方案
最新修订时间：
材料与仪器
蛋白质
Tris 腹水液 宁酸盐缓冲液 甘氨酸 乙酸盐缓冲液
超滤器 滤膜
Tris 腹水液 宁酸盐缓冲液 甘氨酸 乙酸盐缓冲液
超滤器 滤膜
步骤
1. 将10 ml 经CNBr活化Sepharose 4B溶胀于1 mmol/l HCl中，然后转移至玻璃沙漏斗中，并用：①200~500 的1 mmol/l HCl和②200~500 ml 偶联缓冲液各连续洗涤不少于30 min。
2. 将Sepharose凝胶转移至50 ml 锥形塑料离心管中，加50~100 mg 的配体，混匀后4℃静置过夜。
3. 250 g 离心10 min，弃上清，加偶联缓冲液至满管，离心，弃上清。
4. 加20~40 ml 1 mol/l pH8.0的乙醇胺，4℃静置4~5 h，离心，弃上清。在管中依次加满PBS和洗涤缓冲液来洗洗涤Sepharose，每次洗完后即离心。
3. 250 g 离心10 min，弃上清，加偶联缓冲液至满管，离心，弃上清。
4. 加20~40 ml 1 mol/l pH8.0的乙醇胺，4℃静置4~5 h，离心，弃上清。在管中依次加满PBS和洗涤缓冲液来洗洗涤Sepharose，每次洗完后即离心。
5. 将Sepharose转移到一个2.5 cm 的玻璃柱中，用100 ml 的PBS平衡。腹水液稀释于3倍体积的PBS后上柱，流速为1~5 ml/min，在室温下操作。
6. 用30 ml 的PBS从柱子上洗去未结合的蛋白，然后用甘氨酸·Cl缓冲液将结合蛋白洗脱下来（见基本方案）。
7. 执行基本方案的步骤5的操作。
来源：丁香实验
