均一浓度的微型凝胶电泳
最新修订时间：
材料与仪器
蛋白质
电泳缓冲液
电泳仪 梳子 注射器 夹子
电泳缓冲液
电泳仪 梳子 注射器 夹子
步骤
1. 按顺序安装带凹口的小玻璃平板或小矩形玻璃平板、0.75 mm 垫片、大矩形玻璃平板叠放在一起组装成夹层，并确保夹层放入多胶灌制装置后，垫片能安放妥当，两头均与玻璃平板的上下边缘对齐。
2. 将凝胶夹层紧密地安放在多板灌胶装置中，用丙烯酸隔板或聚碳酸酯薄片填满灌胶室的空位。
3. 安装制胶室的前面板，于硅胶密封衬条处用夹子固牢，检査证实玻璃平板和垫片的排放整齐。
4. 配制分离胶溶液，0.75 mm 厚的凝胶，配30 ml 溶液。在使用前先不加过硫酸铵和TEMED。
5. 用50 ml 注射器将分离胶液体慢慢注入制胶室，至分离胶高6 cm 即可，留1.5 cm 作积层胶。在胶顶面加入100 μl 水饱和异丁醇，让胶聚合约1 h。
6. 倾去异丁醇，以1×Tris·Cl/SDS，pH8.8缓冲液冲洗凝胶表面。
7. 在配积层胶溶掖前，试将梳子插入夹层，操作上将梳子靠压在矩形的或高的玻璃平板上，以使梳子的齿都在夹层的开口处对齐，然后将它插入夹层，完成上述操作后，再把梳子拔出。
6. 倾去异丁醇，以1×Tris·Cl/SDS，pH8.8缓冲液冲洗凝胶表面。
7. 在配积层胶溶掖前，试将梳子插入夹层，操作上将梳子靠压在矩形的或高的玻璃平板上，以使梳子的齿都在夹层的开口处对齐，然后将它插入夹层，完成上述操作后，再把梳子拔出。
8. 配积层胶溶液，用10 ml 注射器将积层胶溶液分别加入各夹层，插入梳子，小心不要引入气泡，让凝胶聚合1 h。
9. 取去前面板，小心将凝胶板从制胶室中取出，用长刀片将各片胶板分开。
10. 拔出梳子，以1×SDS电极缓冲液冲洗样品扎，用记号笔在前面玻璃极上划线以提示出样品孔底部的位置。
11. 往上、下缓冲液贮槽加入1×SDS电极缓冲液，上槽的液体应高出四口平板2~3 cm。
12. 制备待测蛋白质祥品和蛋自质分子量标准混合物用微量吸管加样，把吸管头穿过上槽缓冲液插入加样孔中，在平板玻璃上的划好的记号提示下， 将样品加入孔中。
12. 制备待测蛋白质祥品和蛋自质分子量标准混合物用微量吸管加样，把吸管头穿过上槽缓冲液插入加样孔中，在平板玻璃上的划好的记号提示下， 将样品加入孔中。
13. 0.75 mm 厚的凝胶在10~15 mA 电流下电泳至染料前沿到达凝胶底部。
14. 拆卸装置并取出凝胶，进行蛋白质检测。
14. 拆卸装置并取出凝胶，进行蛋白质检测。
来源：丁香实验
