紫外分光光度法（核酸纯度、浓度与分子量测定实验）

一、核酸的纯度测定

1. 将分光光度计打开，预热10分钟。

2. 将核酸溶液中取2 µl，加（或纯水）使体积成为100 µl。

3. 将稀释溶液加入石英管，以TE buffer（或纯水）为标准倒入另一管。

4. 在波长260、280 nm 处测定吸光值。

5. 比较在260 nm 及280 nm 之读值。

二、DNA含量和分子量的测定

1. 称取1.5 g 琼脂糖加入盛有100 ml 0.5×TBE电泳缓冲液三角瓶中，摇匀，在微波炉上加热至琼脂糖完全溶解。加入溴化乙锭（EB）至终浓度0.5 ug/ml，并摇匀。

2. 用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子，将溶解的琼脂糖倒入，室温冷却凝固。

3. 充分凝固后撕掉两端的胶布，垂直向上小心拔出梳子，以保证点样孔完好。凝胶置入电泳槽中，加0.5×TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1~2 mm。

4. 用移液器吸取DNA样品8 μl 与 2 μl 的载样缓冲液混匀，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉入点样孔下部。同时点10 μl DNA Marker作为分子量标准。

5. 打开电源开关，调节电压至3-5 V/cm，可见到条带由负极向正极移动，约半小时后即可观察。

6. 在凝胶图象分析仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准比较被扩增产物的大小；同时比较标准浓度及未知浓度的亮度，求取DNA 的含量。

1. A₂₆₀/A₂₈₀>1.8表示DNA/RNA的纯度高。若数值<<1.8，表示纯度低，这时由OD₂₆₀测得的DNA含量较不可信，核酸溶液中含有较多蛋白质，因此最好将前述所得核酸再重新抽取。

2. EB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。