原理
溴化乙锭是一种荧光染料，在凝胶电泳中，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下发出荧光，其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260 nm，在此波长下，吸光度1 A相当于一定浓度的核酸，可以通过A260/A280 的比值，来测定所得核酸的纯度。
利用一系列不同浓度的DNA标准溶液（0、2.5、5、10、20、30、40、50 ng/ml），或已知浓度的DNA marker，和未知浓度DNA样品一起进行琼脂糖凝胶电泳，以EB染色后，在凝胶图象分析仪上观察，比较标准浓度及未知浓度的亮度，来求取DNA 的含量。
比较DNA样品与DNA marker条带位置，推知DNA 样品分子量。
材料与仪器
步骤
一、核酸的纯度测定
1. 将分光光度计打开，预热10分钟。
2. 将核酸溶液中取2 µl，加（或纯水）使体积成为100 µl。
3. 将稀释溶液加入石英管，以TE buffer（或纯水）为标准倒入另一管。
4. 在波长260、280 nm 处测定吸光值。
5. 比较在260 nm 及280 nm 之读值。
二、DNA含量和分子量的测定
1. 称取1.5 g 琼脂糖加入盛有100 ml 0.5×TBE电泳缓冲液三角瓶中，摇匀，在微波炉上加热至琼脂糖完全溶解。加入溴化乙锭（EB）至终浓度0.5 ug/ml，并摇匀。
2. 用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子，将溶解的琼脂糖倒入，室温冷却凝固。
3. 充分凝固后撕掉两端的胶布，垂直向上小心拔出梳子，以保证点样孔完好。凝胶置入电泳槽中，加0.5×TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1~2 mm。
4. 用移液器吸取DNA样品8 μl 与 2 μl 的载样缓冲液混匀，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉入点样孔下部。同时点10 μl DNA Marker作为分子量标准。
5. 打开电源开关，调节电压至3-5 V/cm，可见到条带由负极向正极移动，约半小时后即可观察。
6. 在凝胶图象分析仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准比较被扩增产物的大小；同时比较标准浓度及未知浓度的亮度，求取DNA 的含量。
注意事项
2. EB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。
常见问题
（1）ds DNA （double stranded DNA） = 50 mg/ml
（2）ss DNA （single stranded DNA or simgle-stranded RNA） = 40 mg/ml
（3）oligonucleotide = 33 mg/ml
来源：丁香实验
