原理
运用贴块法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。
材料与仪器
脐带
胶原酶消化液 胰蛋白酶 胶原酶 弹性蛋白酶 DMEM
眼科剪 滴管 离心机 培养皿 CO2培养箱
胶原酶消化液 胰蛋白酶 胶原酶 弹性蛋白酶 DMEM
眼科剪 滴管 离心机 培养皿 CO2培养箱
步骤
一、实验步骤
1. 要用胎牛血清。开始用的是小牛血清,所以总是不成功,培养基换为 DMEM/F12,但后来我又换成 DMEM,也培养出来了。
2. 把脐动脉剪开很麻烦,因为它老是打弯,可以找个软木塞,用大头针固定,可用块木板,因为有磨擦力,所以动脉可以固定在板上。
3. 对于新手来讲,最麻烦的就是把组织快剪成1 mm3 大小小块,可以找块磨砂玻璃,切完再剪就 好多了。
4. 把剪碎的组织快移到培养瓶里,可采用类似牙科的刮匙,直接放进瓶里。加入2 mL 培养液, 一定不能放多,防止漂浮。然后用玻璃分针轻轻将小块分离开。
5. 其它的基本就按文献就可以了,如三个小时后翻瓶、换液时保留1/3。
来源:丁香实验