原理
核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA 可以与细胞DNA 整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA 导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。
材料与仪器
细胞样品
HBS CaCl2 TE G418(新霉素G418)液 G418选择培养基
培养瓶
HBS CaCl2 TE G418(新霉素G418)液 G418选择培养基
培养瓶
步骤
1、供体DNA 制备：方法按前介绍的DNA 提取法提取，溶于TE中，40mg/L。
2、受体细胞的培养：研究癌基因转移应选择不含人类Alu序列的动物细胞系作为受体细胞。如小鼠NIH3T3胚成纤维细胞系等，该细胞有一定自发转化倾向，一般在转染前一天接种细胞，接种密度为2×104 /cm2 ,用含10%胎牛血清的DMEM液，37℃、5%CO2 培养，待细胞占50～70%瓶底面积时，用于转染试验。
3、DNA -磷酸钙沉淀物的制备
①将供体细胞DNA 和PSV2-neo质粒载体DNA 用TE配制成40mg/L的DNA 溶液，同时向供体细胞DNA 液200μl中加入带基因neo质粒DNA 液(20mg/L)220μl和2×HBS 250μl(PSV2-neo为1～2mg/L的使用量)。
②取500μl上述DNA 溶液加入硅化试管中，缓慢加入3.1ml、2mol/L CaCl2 混匀30秒。
③然后立即混旋，室温下静置30分钟，待溶液轻度混浊后，吹打后即用于转染受体细胞。
4、转染受体细胞
①将处于对数生长期已占瓶底50～70%的受体细胞，在转染前4小时更换一次新鲜培养基，每瓶5ml（25ml培养瓶）。
②吸取0.5ml DNA -磷酸钙沉淀，加入含5ml培养液的细胞瓶中摇匀。
③置37℃ 5% CO2 培养24h或更长，使细胞充分吸入DNA -磷酸钙结晶颗粒。
④更换新鲜培养基，继续培养24小时，诱导转染基因的表达。
注意事项
DNA中存在的杂质会干扰转染效率。
常见问题
磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。
来源：丁香实验
