膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDS-PAGE 和 MALDI-TOF-MS 实验

植物学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

用基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS)鉴定膜蛋白之前，需要将这些蛋白质分离出来用以质谱分析。用非变性去垢剂十二烷基-β-D-麦芽糖苷溶液增溶膜样品后，可用离子交换层析（IEC)分离膜蛋白质，并经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)。本实验来源「植物蛋白质组学实验指南」〔法〕H.蒂勒门特、M.齐维、C.达默韦尔、V.米琴主编。

来源：丁香实验

操作方法

膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDS-PAGE 和 MALDI-TOF-MS 方法

3.1 膜的分离因为在研磨材料时，要分离的膜组分以小囊泡形式与可溶的胞质蛋白质混合在一起，所以，最好在分离、鉴定膜蛋白前将这些胞质蛋白质去除掉。为了达到这个目的，我们需要用可穿透这些囊泡的达到临界微胞浓度（CMC) 的去垢剂溶液来分离膜组分( 见注释 1) ，使包覆亲水性蛋白质慢慢地向外扩散。增溶缓冲液还含有一种离液盐和一种二价金属螯合剂用来解离松散结合在膜周边的蛋白质。这里所介绍的分离植物质