水稻叶片和根蛋白质的纳升级二维液相色谱串联质谱实验

植物学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本章我们介绍运用 2D 液相色谱串联质谱大规模鉴定水稻叶片和根组织中的蛋白质的详细实验方法。该方法通过带有电喷雾发射喷器的纳升级流速双相层析柱（强阳离子交换/反相）来实现，这种技术的缩写名为 Mudpit( 多维蛋白鉴定技术）。本实验来源「植物蛋白质组学实验指南」〔法〕H.蒂勒门特、M.齐维、C.达默韦尔、V.米琴主编。

来源：丁香实验

操作方法

水稻叶片和根蛋白质的纳升级二维液相色谱串联质谱

3.1 叶片和根组织的取材以及蛋白质沉淀 ( 1 ) 从植物的中部切取未衰老的绿色叶片，立即放入自封塑料袋中冷冻。如果没有冷冻设备，可先放在冰上，然后再放到 -20°C 保存。 ( 2 ) 挖出植物根系，在绿色茎段以下一英寸的地方取材。抖动根系，并快速的依次放入 3 个大烧杯中洗去土壤，然后再放入自封塑料袋中冷冻，或暂时保存在冰上。 ( 3 ) 称取 2.5 g 去除了茎秆和其他物质的冰冻叶