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简介
真核细胞胞质中纵横交错的纤维网称为细胞骨架。根据纤维直径、组成成分和组装结构的不同分为微管、微丝和中间纤维。目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、酶标和组织化学等。微丝是肌动蛋白构成的纤维。单根微丝直径约 7 nm,在光学显微镜下看不到。在不同种类的细胞中,它们与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构,如肌肉细丝、肠上皮微绒毛轴心和应力纤维等。本实验用考马斯亮蓝 R250(Coomassie brilliant blue R250)显示微丝组成的应力纤维。应力纤维在体外培养的贴壁细胞中尤为发达,与细胞对培养基质的附着和维持细胞扁平铺展的形状有关。
原理
微丝染色及形态观察实验的基本原理是考马斯亮蓝 R250 可以染各种蛋白,并非特异染微丝。但在该实验条件下,微管结构不稳定,有些类型的纤维太细,光学显微镜下无法分辨。因此,我们看到的主要是由微丝组成的应力纤维,直径约 40 nm。
来源:丁香实验团队
操作方法
真核细胞胞质中纵横交错的纤维网称为细胞骨架。根据纤维直径、组成成分和组装结构的不同分为微管、微丝和中间纤维。目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、酶标和组织化学等。微丝是肌动蛋白构成的纤维。单根微丝直径约 7 nm,在光学显微镜下看不到。在不同种类的细胞中,它们与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构,如肌肉细丝、肠上皮微绒毛轴心和应力纤维等。本实验用考马斯亮蓝 R250(Coomas