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细胞冻存实验
最新修订时间：
简介
细胞冻存是指利用加入保护剂的冻存液将细胞冻存于-175℃ 液氮中。目前常用的保护剂有二甲基亚砜（DMSO）和甘油，保护剂要求对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞，使用浓度范围在 5％-15％ 之间，常用浓度为 10％。DMSO 本身有毒，无需过滤或高压灭菌，而冻存液可以过滤除菌。
原理
细胞冻存实验的基本原理是细胞冻存于-175℃ 液氮中，如果不加任何条件直接冻存细胞，细胞内外环境中的水会形成冰晶，导致细胞内发生一系列变化，如机械性损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH 改变及蛋白质变性等，最终导致细胞死亡。
如果冻存液中加入保护剂，可使冰点降低，在缓慢冻结的条件下，能使细胞内水分在冻结前渗出细胞外。-130℃ 以下低温贮存能减少冰晶形成。
来源：丁香实验团队
操作方法
细胞生长至对数中晚期，以培养基制备高浓度细胞悬液，加入细胞保护剂，等份转移至冻存管中，缓慢冷冻。市场上有多家成熟的无血清冻存液，这些试剂简单实用，极其便捷。对一些难复苏的细胞极其友好。但是对于长期的细胞留库保种还是建议采用传统的方法。两种冻存液比较方法优点缺点传统 DMSO/甘油冻存法能较好的维持细胞的特性一些细胞冻存效果不佳无血清无蛋白冻存法使用方便，对新手友善同样含有 DMSO，某些敏感细胞慎
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