脐带和脐血来源干细胞的培养实验
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简介
脐带血（UCB)是出生后脐带（UC)和胎盘中的血液。近年来逐渐认识到UCB是HSCs和其他干细胞的一个重要来源，还具有操作和伦理的优势。从]988年第一例UCB移植治疗范可尼贫血的儿童后，由于其低病毒接触，在1〜2个HLA位点不匹配的无关供者移植时严重GVHD的发生率降低，而骨髓移植则需要严格的供、受者组织相容性匹配，UCB移植已成为一种安全和可接受的HSC移植模式。来源：《人干细胞培养》
来源：丁香实验
操作方法
(a)出生后，用两个夹子在近新生儿的末端和近胎盘的末端夹住脐带以封闭脐带;(b)剪下两个夹子间的脐带，一端在接近新生儿处，另一端剪去胎盘；(c)剪下脐带后放入运输培养基中送去实验室，整个处理过程在6〜12 h内。(a)夹住脐带，尽可能靠近新生儿处剪断脐带。(b)用Betadine或70%酒精的棉花擦拭针头插入位点，位点在脐带近胎儿末端。(c)为了收集到最大量的脐血，脐带的处理动作要尽可能小。(d)
从脐静脉分离干细胞(a)在正常分娩后6〜12h内收集和处理脐带。(b)在脐静脉内插入导管，用PBSA完全地洗2次。(c)夹住远端脐带。(d)用0.1%胶原酶溶液充满静脉。(e)夹住近端脐带。(f)将脐带在37℃孵育20min。(g)轻轻按摩脐带，收集含有内皮和内皮下层细胞的悬浮液，600g离心10min。(h)用培养基重悬细胞。(i)计数后，按1×103个细胞/cm2的密度将细胞接种到75cm2的培养瓶中。(j)3
种植法从Wharton胶中分离干细胞(a)正常分娩后获得脐带，保存在PBSA中，1〜24 h内处理标本。(b)去除血管，将Wharton胶切成小块。(c)将种植块转移到加有DMEM/FBS的6孔板中。(d)将培养板静置5〜7天，使细胞从种植块中爬出后再更换
种植法从Wharton胶中分离干细胞(a)正常分娩后获得脐带，保存在PBSA中，1〜24 h内处理标本。(b)去除血管，将Wharton胶切成小块。(c)将种植块转移到加有DMEM/FBS的6孔板中。(d)将培养板静置5〜7天，使细胞从种植块中爬出后再更换
酶消化法从Wharton胶中分离干细胞(a)脐带取材后，可在PBSA中保存1〜24h。(b)除去血管，将Wharton胶剪成大约0.5cm的小组织块。(c)将剪碎的组织块转移到50mL离心管，用无血清DMEM洗，室温250g离心5min。(d)倒掉上清液，将离心后的沉淀物拍散，浸泡在0.1%胶原酶（大约是沉淀物体积的3倍）中，37℃消化16〜18h。(e)加人适当体积的PBSA(消化液体积的2倍），室温250g离心5min。(f)倒掉
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