从脐静脉分离干细胞

(a)在正常分娩后6〜12h内收集和处理脐带。

(b)在脐静脉内插入导管，用PBSA完全地洗2次。

(c)夹住远端脐带。

(d)用0.1%胶原酶溶液充满静脉。

(e)夹住近端脐带。

(f)将脐带在37℃孵育20min。

(g)轻轻按摩脐带，收集含有内皮和内皮下层细胞的悬浮液，600g离心10min。

(h)用培养基重悬细胞。

(i)计数后，按1×103个细胞/cm2的密度将细胞接种到75cm2的培养瓶中。

(j)3天后更换培养基，除去未贴壁细胞，保留贴壁的细胞继续培养，每3天更换一次新鲜培养基，至大约2周后可见成纤维样细胞生长。

(k)在这种情况时，用0.05%胰蛋白酶/EDTA收集细胞，传代到新培养瓶中继续扩增。