制备肌动蛋白实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白

1. 抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分钟。肌球蛋白抽提溶液： 0.5 mol/L KCl 0.1 mol/L K2HPO4 2. 抽提物离心（GSA 转头，13000 r/min，17310 g）15 分钟，去掉上清。 3. 在肌肉残渣中加 1 L 冷的 dH2O，搅拌，然后用 1 mol/L Na2CO3 调 pH 到 8.2~8.5。

由骨骼肌丙酮粉制备肌动蛋白

1. 准备贮存液和材料 0.1 mol/L K+ATP，pH 7.0 0.1 mol/L DTT（冻存在 -20℃，避免反复冻融） 0.1 mol/L CaCl2 0.1 mol/L Tris-HCl，pH 8.0 肌动蛋白解聚缓冲液（惯称冷缓冲液 A)： 2 mmol/L Tris-HCI，pH 8.0 0.2 mmol/L ATP 0.5 mmol/L DTT 0.2 mmo

将肌动蛋白纯化成纯品

1. 准备 2~8 mg/ml 溶在缓冲液 A 中的常规肌动蛋白。 2. 10 ml 常规的肌动蛋白上样到凝胶过滤柱（2.5cm x 50cm Sephadex G-150 柱，用缓冲液 A 平衡）。 3. 肌动蛋白样品进入凝胶后，上面加缓冲液 A，并且用 275 ml 缓冲液 A 跑柱子。 4. 以每管 5 ml 作分部收集。 5. 收集液通过 OD260 和 SDS-PAGE 检测肌动