高尔基体的分离实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

从大鼠肝脏中分离高尔基复合体

1. 将按要求进用标准食物和饮水的雄大鼠（约 250 g) ，用断头和放血的方法处死。 2. 切下肝脏（10~13 g ) 并用刀片切碎。 3. 用一只 Polytron 匀浆器（20 ST 或 10 ST；Brinkman lnslruments) 以 10000 r/min 的频率将每份肝脏在 2 倍体积的匀浆介质中处理 40 秒钟。匀浆缓冲液： 50 mmol/L Tris -马来

从培养的哺乳动物细胞中分离高尔基体

1. 向 6 ml 的粗匀浆液中（细胞收获后以大约 5X105 /ml 悬于 0.25 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 中），加入 6 ml 含有 10 mmol/L pH 7.4 Tris-HCl 的冰浴的 2.3 mol/L 蔗糖，将蔗糖浓度调整到 1.4 mol/L。 2. 加入 100 mmol/L 的 Na2EDTA 母液并混合使终浓度为 1

从植物组织中分离高尔基体

1. 先用剪刀大致剪切叶片或茎杆，然后在少量的介质中用刀片切成碎片。 2. 对于 1 g 新鲜组织，在 1 ml 介质中用研钵和杵捣碎使组织匀浆化。匀浆介质： 50 mmol/L FiEPES 10 mmol/L KCI 1 mmol/L EDTA 10 mmol/L 抗坏血酸 0.1% BSA 5 mmol/L DTT，pH 7.5 0.4 蔗糖 3. 用单层的 Mirac