细胞核连缀分析实验

一、用超速离心法从组织中分离细胞核 1. 切下动物组织，放入置于冰上的平皿中，用冰冷的 PBS 冲洗。 2. 加少量蔗糖Ⅰ溶液，用剪刀或剃须刀片将组织切碎，转入一个干净试管中，加蔗糖Ⅰ溶液至终体积为每克组织 10 ml。 3. 用特氟隆研杵在电动匀浆器中将细胞匀浆裂解。 4. 于 1000 g 低温离心 5 分钟收集细胞核。 5. 用 2 ml 蔗糖Ⅱ，用移液管猛力吹打重悬沉淀，然后加蔗

1. 融解从 1 g 组织或 5 瓶培养皿细胞制备、冻存于 NSB 中的细胞核。1000 g 离心 5 分钟，去上清，用 200 μl HRB 轻轻吹打重悬。 2. 将悬液转至一个带有抗酚螺帽的硅化玻璃试管，37℃ 水浴 5 到 15 分钟（由预实验决定)。孵育过程中，偶尔轻轻搅动细胞核，避免沉于管底。 3. 加入 1.5 ml HSB 和 90 μl DNA 酶Ⅰ（终浓度 100 单位/ml

一、狭线印迹的制备 1. 如果用的是环状质粒 DNA，用适当的限制酶使 DNA 探针线性化。每个狭线需用 5 μg DNA。 2. 往线性 DNA 溶液中加氢氧化钠至 0.1 mol/L，混匀，室温放置 30 分钟使 DNA 变性。加 1.5 倍体积 6xSSPE 置于冰上中和。中和后的 DNA 浓度应接近于 10 μg/ml。 3. 按说明书装配印迹装置，往狭线印迹装置的加样孔内加 0.5