小鼠胚成纤维细胞的培养和体外分化

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

原代MEF的分离和冻存

1. 准备下列试剂和材料：确定怀孕期的母鼠（孕期14至6天）无菌解剖器械（镊子、剪刀、手术刀片） Cellector 带收集装置的不锈钢滤网，1 mm 直径筛网内有搅拌棒的 125 ml 无菌的胰蛋白酶消化的烧瓶有搅拌盘的培养箱无 Ca2+ 和 Mg2+ 的 PBS 胰蛋白酶溶液 DNase 溶液（10 mg/ml） MEF 生长培养基 MEF 冻存培养基 150

MEF滋养板的制备

1. 准备下列材料 MEF 生长培养基胰酶溶液无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS 丝裂霉素 C 明胶溶液（0.1%） 150 mm 组织培养皿滋养细胞组织培养皿 2. 准备一支 15 ml 离心管，加 5 ml 预热（37℃）MEF 生长培养基。取一支液氮冻存的 MEF 细胞，37℃ 水浴中轻轻振荡，细胞融化后转移到离心管中。 3. 离心收集细胞，悬于 10 ml MEF