人毛细血管内皮细胞的分离

1. 准备下列器械并消毒（高压灭菌，或者可能的话一次性使用）： 大剪刀（两把） 刮刀（两或三把） 胰蛋白酶消化的烧瓶（每 30 g 绞碎样品一个） 带接液器的 250-μM 钢筛网 15-ml 和 50-ml 离心管 2. 分离组织样品。所有操作在层流柜中进行。 (1) 从腹整形样品分离 ① 解剖样品，去除任何皮肤、筋膜、肌肉等，只保留脂肪组织。称重样品，每 10 g 分装一份。

1. 短暂振荡，使磁珠溶液均一。 2. 用 PBS 稀释 PBS/BSA（4.0 mg/ml BSA）至 BSA 终浓度 0.2 mg/ml。 3. 取 100 μl 磁珠（1 mg）加 2 ml 含 0.2 mg/ml BSA 的 PBS（20 倍稀释磁珠混合物）。混匀，用钴-钐磁体分离样品。 4. 弃上清，沉淀悬于 100 μl PBS（含 BSA 0.2 mg/ml）。 5. 磁珠偶

1. 向“分离样品的制备”步骤10的细胞样品中加入 30 μl 偶联了抗 PECAM 抗体的磁珠。 2. 细胞和磁珠混合物冰上保温 15 分钟。 3. 磁体置于管侧 5 分钟，吸引筛选样品向磁体移动。小心吸弃上清，移开磁体。 4. 向磁珠中加 2 ml PBS/FCS，轻轻混匀，确保没有大的团块。用磁体重复筛选。 5. 重复步骤3和4三次。 6. 磁粒悬于 1 ml 接种培养基中。 7