支原体的检测实验

1. 标本制备 用尖镊子从培养瓶中直接取出预先置入的支持物（长形盖片；24 小时前置入），令细胞面向上，置放在载物片上，再覆以24 mmX 36 mm的较大盖片；如不用支持物培养法，也可取少许培养液滴在载物片上，再覆以盖片法观察亦可。 2. 观察 相差显微镜油浸下观察，支原体呈暗色微小颗粒，有类似布朗运动的表现，多位于细胞表面和细胞之间。

1. 取材 用支持物盖片培养法或培养液均可；用培养液时，先吸取培养液1 毫升，500～800 转/分，离心5 分钟后去上清，余0.2 ml备用。 2. 低涨处理 用新鲜配制的0.5 %的枸橼酸溶液，处理盖片细胞或加入到1项0.2 ml中（悬液）置10 分钟。 3. 固定 用新配制的Carnoy液固定两次，共10 分钟，取出盖片凉干；如为培养液，则应先离心弃上清固

1. 标本盖片培养细胞汇合前从瓶中取出（如细胞已完全汇合，能影响对支原体的观察）；2. 漂洗将细胞盖片置于碟皿中，用不含酚红的Hanks液漂洗；如为细胞悬液则先离心去上清营养液后，再加入Hanks液漂洗；3. 固定用醋酸甲醇（1：3）固定10 分钟；4. 漂洗用生理盐水或去离子水漂洗，处理方法同2；5. 染色置于33258（用不含酚红的Hanks 或生理盐水配制，浓度为50 μg/ml）

1. 细胞培养 48～72 小时。 2. 接近汇合前，用0.05%～0.25%胰蛋白酶消化细胞5～10 分钟。 3. 用吸管轻轻吹打，制备成细胞悬液。

1. 肉汤制备 用支原体肉汤（Sigma 产）和北京生物制品所制两种均可；用前加10%马血清； 2. 培养 每45 ml肉汤培养基加2.5×106 /ml细胞悬液5 ml；培养14 天后观察肉汤培养基颜色变化； 3. 菌落培养 培养14 日后取0.5 ml加入到已冷却到50 ℃培养基中； 4. 为分离支原体进行深入研究，可用琼脂培养基做分寓培养。