免疫酶染色试验

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

免疫酶染色试验一般都由两部分组成，即一次或数次抗原和抗体的免疫学反应和一次酶促反应。第一步抗原抗体结合中，酶结合物起抗体作用，在第二步加入底物后，酶起到了催化的生物放大作用。该方法具有敏感性高，标本可长期保存，使用一般光学显微镜就能观察等优点，但有时也存在非特异性染色的问题。来源：《病毒学检验》

来源：丁香实验

操作方法

细胞免疫酶染色法（以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明）

(1) 首先将保存的 EB 病毒细胞抗原片，移于室温，吹干。(2) 每孔内滴加 0.01mol/L PBS(pH 7. 4) 稀释的待检血清（每个标本加 1 孔），同时分别加1 :10 稀释的 EB 病毒 VCA IgA 抗体阳性和阴性血清各 2孔做为对照，移入湿盒中置 37℃温育30 min 后，用 PBS 液洗 3次，每次 5 min 。(3) 每孔内滴入用 PBS 液作适当稀释的 HRP 标

免疫印迹法（以检测流行性出血热病毒结构蛋白和 NP 核蛋白为例说明）

1) 样品制备：病毒感染 Vero E6 细胞后的上清培养液，经 4℃ 5000 r/min 离心 30 min, 离心后的上清移至超速离心管（每管 35 ml 左右），加 300 g/L 蔗糖-TNE 垫层， 25000 r/min 离心 2 h, 弃上清，用少量 TNE 悬起沉淀即为初步纯化病毒。2) 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE): 采用不连续系统，将 25µl 样品加等量样品缓冲

斑点免疫酶染色法 (dot-ELISA)实验（以检测轮状病毒抗原为例说明）

1) 根据微孔板孔的大小，将滤膜切成大小合适的小条，编号。2) 抗体点膜：用微量注射加样器取包被抗体加在滤膜一端，每点 2µl, 室温干燥固定 30 min 。3) 封闭：用含10 g/L 牛血清白蛋白的 0.Olmol/L PBS (pH 7.4)37℃封闭1h,凉干后置 4℃冰箱备用。4) 加粪样：取待测病人粪样上清 100 µl 加入微孔板孔内，然后插入已包被抗体的滤膜小条，置湿盒 37℃