酵母菌细胞的诱变实验

实验分类：

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

诱变可通过测定抗刀豆氨酸突变型出现的频率的对照试验来监测。在最佳诱变条件下，抗刀豆氨酸的突变频率，诱变后应该是未诱变的100倍以上。一般取得特定类型的突变体的频率完全取决于所要寻找的突变的性质。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案（甲乙硫醚诱变）

1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。 2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5~10 s，细胞重悬于1 ml 无菌水中，重复洗涤。再用1.5 ml 无菌的0.1 mol/l pH7.0的磷酸钠缓冲液重悬细胞。 3. 在13 mm×100 mm 培养试管中先加入1 ml 缓冲液

紫外光诱变

1. 将过夜培养的酵母菌培养液接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养。离心5~10 s，用1 ml 无菌水重悬沉淀细胞，重复洗涤1次，再用1 ml 无菌水重悬。 2. 检查细胞密度，记录数据后将细胞密度调整到2×108细胞/ml。用无菌水系列稀释细胞悬液，最终确定在平板上生长出100~200个菌落的稀释度。在平板上分别涂布0.1 ml 和0.2 ml 释的菌悬液。 3.