基于 RNA 干扰的动物基因敲低技术

实验动物

最新修订时间：2022-02-10

简介

RNAi 是一种通过体内的剪切形成小的（大约 21nt）双链 RNA，而其中的反义链与靶向基因的转录本互补，形成的双链结构介导持续的靶向基因的降解，从而使得靶向基因沉默。与基因敲除相比，RNAi 介导的基因沉默更加快速，节约高效，其广泛地被用于功能基因组的研究，也非常适应研究广泛生物的同源基因。

原理

基于 RNAi 的 knock-down 的技术原理是使用 II 型启动子转录长的反向互补长片段，经过转录形成长的发卡结构转录本，经过细胞内的 RNA 加工形成双链的短的干扰 RNA；同样可以通过单个 II 型启动子启动反向互补的目标 siRNA 序列形成一个发卡结构，最终经过剪切形成双链 siRNA；使用两个 II 型启动子启动短的 RNA 退火形成双链短 RNA；以及表达 miRNA 在体内形成可 knock-down 的短单链 RNA。这些载体都最终形成 RISC，随后形成组织 mRNA 的剪切或降解，从而使得目标基因沉默。

来源：丁香实验团队

操作方法

基于 RNA 干扰的小鼠 PKD2 基因敲低

RNAi 是一种通过体内的剪切形成小的（大约 21 nt）双链 RNA，而其中的反义链与靶向基因的转录本互补，形成的双链结构介导持续的靶向基因的降解，从而使得靶向基因沉默。与基因敲除相比，RNAi 介导的基因沉默更加快速，节约高效，其广泛地被用于功能基因组的研究，也非常适应研究广泛生物的同源基因。