将 DNA 导入酵母细胞实验

1)在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 mL YPD培养基中，于 30℃恒温摇床，培养过夜达到饱和。2)转化的前一天晚上，往1 L无菌烧瓶中加入300 mL YPAD培养基，然后接种适量的 饱和培养液，再于30℃培养过夜，到细胞密度为1×l07细胞/mL OD600=0.3〜0.5，依据菌株而定）。为了获得2〜3倍高的转化效率，此时用新鲜的YPAD培养 液稀释使细胞密度为2×106

1) 实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 mL YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。2) 转化前1天晚上，在装有500 mL YPD培养基的2 L无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过夜，直到细胞密度达1×lO8细胞/mL (OD6这一细胞密度表明细胞处于对数生长的中后期。如果对特定的菌株不知道其精确的生长期，可以用不同体积的饱和培养液接种3个不同的烧瓶（基本方案步骤2

1) 将DNA溶于pH 8.0的1×TE缓冲液，终浓度为10 mg/mL，于4℃搅拌过夜。 因每一次转化需要用200 载体DNA,制备大量的载体DNA Gnig)并于-20℃冻存分装很有用。2) 用一个大的超声探头，在75%的最大功率下超声处理DNA 30 s，以降低DNA溶液 的黏度。取1 mg DNA在0.8%琼脂糖凝胶上电泳，检查超声剪切后片段大小的分布。如果有必要，可重复超声处理，直到获得