酵母菌基因组转座子的诱变实验

1)溶液干了之后，从转座子诱变基因组文库的个体库里分配质粒DNA (每个库约为1μg DNA)。短时间离心每个干的样品，用pH 8. 0的TE缓冲液以合适的容积重悬每 个库的DNA (如每个库10体积)。文库DNA的每个库都被单独诱变；所以分开 处理每个库的DNA以保证得到独立插入等位基因。2)从每个库中取适当的DNA的量，以标准的转化步骤转入对任何四环素 (tets)和卡那霉素（kans)敏感的

1)准备小载体PCR，合成锚定囊泡引物。形成锚形囊泡如下：a.配置一种水溶液，这种溶液中含有2〜4 mmol/L的每种锚定囊泡引物1和2。b.在加热块上以95℃孵育5 min变性。c.加入1 mol/L MgCl2至溶液终浓度为2 mmol/L通过从底部装置撤掉加热块并将其放在试验台上直至冷却到室温使其变性。-20℃储存至第5步。2)合成普通小载体（UV)引物。合成与产生插入文库的mTn互补的引物

1)用pGAL-cre(pB277)标准操作转化mTn诱变酵母菌株。在CM- Leu, -Ura缺失成分培养基平板上选择转化株。此质粒包含以下元件：amp、ori、CEN和LEU2。2)将转化株接种到2 mL的含有2% (m/V)棉籽糖的-Leu，-Ura的Raff/CM缺失成 分培养基里，棉籽糖作为碳源抑制GAL启动子。30℃通风孵育直到培养物生长到饱和状态。3)在2 mL含有2%的半乳糖的Ga