方法三：酵母菌基因组DNA的提取

 

方法三：酵母菌基因组DNA的提取

 

一：仪器： 同方法一

 

二：试剂： SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（50mg/ml）；20％PVP；蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6  0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前

 

三：操作

 

  1.5ml  对数生长期细菌细胞

 

         离心，12000rpm,1-2min

 

       沉淀

 

         溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr

 

             离心，12000rpm,8-10min

 

            沉淀

 

溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr

 

              加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混匀  65℃,30min

 

等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,

 

离心,12000rpm,4-5min

 

          上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。