干细胞的分离纯化实验

密 度 梯 度 离 心 法 试 剂 配 制 (1) 淋 巴 细 胞 分 层 液 ：有成品供应，密度为 (1.077±0.001)g/ml。 (2) 台盼蓝染液：见 附 录 2。 操 作 方 法 (1) 取血放入抗凝管，摇匀，用 pH7.2——7.6 的 Hank 缓冲液 (或磷酸盐缓冲液) 稀释血液 1——2 倍 。 ⑵ 取 淋 巴 细 胞

单抗贴壁铺展法 单抗贴壁铺展法又称洗淘法 (panning)。此方法的基本原理是抗原-抗体的特异性结合反应，因此称为单抗贴壁铺展法。将聚苯乙烯培养瓶或培养板用抗体包被，然后将细胞与其共孵育，这样，那些表达所包被的抗体所对应的抗原的细胞就选择性地结合到培养瓶或培养板的表面而与其他未结合的细胞群分开。收集未黏附细胞群，即阴性选择；漂洗培养瓶或培养板后，收集黏附细胞群，即阳性选择。如

分 选 前 标 本 制 备 M A C S 技术可以使用的细胞来源很广泛，包括人类的外周血、骨髓、脐带血、冷冻保存的外周血和骨髓、淋巴结、扁桃腺、肿瘤组织、体腔液，小鼠的脾脏、骨髓、胎肝、胸腺、淋巴结，其他动物以及其他种类的细胞 (如培养细胞、大脑细胞、皮肤细胞等)。由于细胞团块和死细胞的存在一方面会堵塞分选柱，降低分选效率，另一方面会与磁珠非特异性结合，造成分选后细胞纯度降低。

S P 细 胞 分 选 方 法 分 选 原 理 Hoechst-SP 细胞的分选纯化是干细胞纯化方案中的一部分。一些研究者利用某些单一的细胞表面标记，另一部分研究者则利用一些表面标记的组合及一些细胞特征，如利用 SP 细胞有低突光染色的特点来研究 S P 细胞。传统的方法是用单一波长，利用 Hoechst染料能在干细胞内富集的特点来进行分选，虽然分选出的具有低 G 〇期的

组织消化法 实验材料及试剂 ①眼科弯剪、组织镊、筛网 (200 目)；②培养皿、培养瓶、离心管、吸管；③ D-Hank缓冲液高压灭菌， 4℃：保 存 ；④胰蛋白酶或胶原酶；⑤完全培养基；⑥实验动物。 操作方法 (1) 将组织块置于无菌培养皿中，用 H a n k 缓冲液或无血清培养液漂洗，洗去血污，对于内脏组织要剥去外包膜。 (2) 用眼科弯剪将组