免疫组织化学法实验
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简介
免疫组织化学（immunohistochemistry， IHCS) 是用特异性抗体检测组织切片中抗原的一种方 法 。 在鉴定蛋白质方面，IH C 有着其他技术无法比拟的独特优点，可以将抗原检测与其在组织或细胞中的定位联系起来，这对于正常或病理组织的细胞功能研究具有重要意义。 19 世 纪 40 年代末 [1] ,Coons 首先建立了免疫组织化学法，随后被广泛应用到生物学的多个领域，包括细胞功能研究、肿瘤形成过程的研究，以及感染性疾病的检测等。免疫组织化学，顾名思义，是 将 3 个重要领域连接起来: 形态学、组织化学和免疫学。本章将会重点介绍组织切片中抗原的检测，也会简单介绍细胞玻片的染色 (这种情况应称为免疫细胞化学）
作者：霍华德,本实验来自「抗体制备与使用实验指南」
来源：丁香实验
操作方法
载 玻 片 高质量的免疫组化结果需要组织切片与载玻片之间很好地结合，以防止由于组织黏附问题导致的试剂聚集和假染色。商品化的专门用来进行免疫组织化学染色的载玻片是经过标准化包被的。这里将介绍两种方法对常规载玻片包被以用于免疫组织化学染色。 一、聚左旋赖氨酸（poly-L-Iysine) 包被玻片法 (1) 准 备 0. l % ( w/V) 聚左旋赖氨酸水溶液（Si
抗原修复技术去 污 剂 和 离 液 序 列 高 的 物 质 去污剂可在水溶液中形成微粒，能降低水表面张力，所以也是一种表面活性剂。去污剂模拟脂质双分子层环境，可以溶解膜蛋白，形成由脂质、去污剂及含蛋白质的去污剂微团组成的混合微粒 (通常一个微粒包含一个蛋白质分子）。免疫组化方法中较为常用的去污剂是非离子型，这些物质适合于打断脂质-脂质、脂质-蛋白质间的相互作用而不破坏蛋白质-蛋白质相互作用；
免疫酶技术免疫酶技术 免 疫 组 化 技 术 种 类 繁 多 ，通 常 对 经 典 方 法 的 改 进 可 优 化 免 疫 反 应 ，提 高 对 抗 原 的 检测 。任何一种免疫组化方法的最终目标是：在尽可能少的背景下，检测到最大量的抗原(最大值的信噪比）。过去，只能采取一些直接法 (用酶或荧光染料标记一抗），虽然可快速地检测到抗原，但敏感性低。间接法是指不标记一抗的一些方法，这些方法由两
间 接 免 疫 荧 光 技 术间 接 免 疫 荧 光 技 术 方法 (1) 用 pH7. 2 的 PBS 水化石蜡切片或冷冻切片 5 min。 (2) 擦掉多余的缓冲液，在一抗中孵育 30 min。 (3) 用漂洗缓冲液清洗三次。 (4) 在与荧光素结合的二抗中孵育 30 min。 (5) 用漂洗缓冲液清洗三次。 (6) 根据生产商的推荐，用合适的封固剂封片。
