免 疫 组 织 化 学 法 实 验

载 玻 片

高质量的免疫组化结果需要组织切片与载玻片之间很好地结合，以防止由于组织黏附问题导致的试剂聚集和假染色。商品化的专门用来进行免疫组织化学染色的载玻片是经过标准化包被的。这里将介绍两种方法对常规载玻片包被以用于免疫组织化学染色。

一、聚左旋赖氨酸（poly-L-Iysine) 包被玻片法

(1) 准 备 0. l % ( w/V) 聚左旋赖氨酸水溶液（Sigma P-8920)。

(2) 将载玻片浸人溶液中。

(3) 室温干燥。

(4) 室温保存。

二、 APTS 包被破片法

(1) 准备含 2 % ( V/V) 硅烷（Sigma A-3648) 的丙酮溶液。

(2) 将载玻片浸人丙酮中 1〜5 min。

(3) 将载玻片浸人含 2 % 桂焼的丙酮溶液中 1〜5 min。

(4) 将载玻片在丙酮溶液中连续洗两次，每 次 5 min。

(5) 室温干燥并储存。

三、 细 胞 涂 片 / 离 心 细 胞 涂 片 制 备

(1) 在硅烷/聚左旋赖氨酸包被的载玻片制备细胞刮片/细胞离心涂片。

(2) 室温下干燥 30 min。

(3) 在预冷的、新鲜的丙酮中一 20°C 固 定 20 min。

(4) 室温下风干至少 15 min。

(5) 对细胞刮片/细胞离心涂片染色。

五、 注意

(1) 1 0 0 % 乙醇可替代新鲜丙酮使用；固定剂的选择取决于组织中要染色的目的抗原。

(2) 未染色的载玻片可以包被在铝箔中 ，-20°C 保存。当准备染色时：打开铝箔，取出载玻片并恢复至室温，用保存之前相同的固定剂进行后固定至少 30s ，风 干 切 片 ，在缓冲液中再水化 5 min，然后进行染色。

(3) 未染色载玻片的稳定性取决于抗原性质；一些抗原很不稳定必须涂片后立刻染色。

六、 冰 冻 切 片

(1) 切 4 个 7pm 厚的未固定的冰冻切片。

(2) 将切片置于硅烷/聚左旋赖氨酸包被的载玻片上。

(3) 将切片在空气中风干 30 min。

(4) 置于预冷至 4°C 的新鲜丙酮中，固 定 20 min。

(5) 室温风干切片至少 15 mm。
(6) 将切片染色。

七、 注意

(1) 1 0 0 % 乙 醇 可 替 代 新鲜丙酮使用；固定剂的选择取决于组织中要染色的目的抗原。