流式细胞仪测定革兰阴性和革兰阳性细菌生理状态实验

DiBAC4(3)/EB/PI 染色法检测大肠埃希菌和革兰阴性菌功能的基本原理是联合应用金羊醇类染料双-（1,3 二丁基-巴比妥酸）三甲基金羊醇 ［Di- BAC4（3）］ 和 EB 检测。金羊醇可作为 AW 的指标，而 EB 当细菌能量代谢受损、外排泵灭活时，可被具有完整细胞膜的细胞保留在胞内。碘化物（PI）是用来证明胞膜通透性的; 一旦 PI 进入细胞, 它可以从核酸中置换 EB, 可能是由于 PI 带有两倍于 EB 的阳电荷而与核酸具有较高亲和力。所有 3 种染料均可被 488nm 激光激活,DiBAC4（3）荧光在绿色（〜525nm）荧光通道检测，而 EB 和 PI 分别在~575nm 和＞630nm 通道检测。
DiOC2（3）和 TO.PRO.3 法检测细胞的 AW 和膜的通透性的基本原理是应用 DiOC2（3）红色（~610nm）和绿色（〜525nm）荧光比率和 T0-PR0-3 的远红（＞695nm）检测。DiOC2（3）在 488nm 可被激发, 并作为∆Ψ的指标,T0-PR0-3 用于确定细胞膜的通透性，可由 He-Ne（633nm）或半导体激光（635 ~640nm）激发。在 T0-PR0-3 荧光信号中扣除 DiOC2（3）绿色荧 光信号作为观察细胞膜通透性的指标要比单独采用 T0-PR0-3 荧光鉴别细胞膜可通透性和不可通透性要好。