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小鼠腹腔巨噬细胞分离及纯化

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

巨噬细胞(macrophages,MΦ)是由血液中单核细胞迁入组织后分化形成的成熟类细胞,广泛分布于脾脏、肝脏、腹腔、神经系统以及结缔组织等,具有吞噬杀伤、抗原提呈及免疫调节作用。近年的研究发现巨噬细胞在不同微环境中可以发生不同性质的活化,成为具有不同表面分子和功能特征的亚群。根据其不同的表型特点和功能特点及对 Th1/Th2 应答的诱导,通常将其分为两种类型:经典活化的巨噬细胞(classically activated macrophage,CAM),又称 M1 型巨噬细胞;替代性活化的巨噬细胞(alternatively activated macrophage,AAM),又称 M2 型巨噬细胞。M1 型巨噬细胞具有杀灭微生物、参与炎症及抗肿瘤作用。M2 型巨噬细胞具有很强的免疫调节、组织修复及抗炎能力。
近年研究发现,肿瘤间质中的巨噬细胞即肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)具有 M2 型的特征。TAM 通过分泌 EGF、VEGF 和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移的过程,并与肿瘤血管生成和淋巴管生成密切相关;TAM 亦能产生 PGE2、IL-10、TGF-β和吲哚胺加双氧酶(IDO)等代谢产物参与免疫抑制。

原理

小鼠腹腔巨噬细胞分离及纯化的基本原理是巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可存活 2~3 周,难以长期生存,多做原代培养。可用多种方法培养不同来源的 MΦ,其中以小鼠腹腔取材法最为常用,从小鼠腹腔渗出细胞中分离及纯化 MΦ,正常小鼠每只可收集腹腔渗出细胞约 106,其中 MΦ占 30%。如果给小鼠腹腔注射某种刺激物,可使 MΦ渗出增加,易于分离更多的 MΦ。

来源:丁香实验团队

操作方法

小鼠腹腔巨噬细胞贴壁法分离及纯化

巨噬细胞(macrophages,MΦ)是由血液中单核细胞迁入组织后分化形成的成熟类细胞,广泛分布于脾脏、肝脏、腹腔、骨髓、神经系统以及结缔组织等,具有吞噬杀伤、抗原提呈及免疫调节作用。根据不同的表型和功能特点通常将其分为两种类型:经典活化的巨噬细胞(classically activated macrophage,CAM),又称 M1 型巨噬细胞;替代性活化的巨噬细胞(alternatively

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