阴离子位点显示实验

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

细胞表面存在负电荷，文献称为 anionicsites、anionicgroups 或 negativecharges，国内有人称之为阴离子位点，因为它们在空间平面上呈点阵分布。此外，细胞的基膜上也存在阴离子位点，如血管内皮细胞基底膜，基膜的阴离子位点主要由硫酸肝素蛋白多糖构成，细胞膜与基底膜不同，其阴离子位点主要由唾液酸、某些蛋白的竣基等构成。关于其生物学作用，可能与细胞识别、通透性等有关系。病理情况下（如肾疾病），阴离子位点可减少或消失。由于其带负电荷，因此可用阳离子探针进行标记，常用的有阳离子化铁蛋白、聚乙烯亚胺等。对于阴离子位点的分布模式，电镜观察为线性排列（实际为点阵样分布），颗粒直径大多为 3～20 nm（视染色方法而异），颗粒间的距离大约为 60 nm。

来源：《免疫组织化学实验技术及应用》

来源：丁香实验

操作方法

阳离子化铁蛋白染色法

1. 0.1 mol/L磷酸缓冲液配制阳离子化铁蛋白，浓度为0.2～0.5 mg/ml。2. 组织样品悬浮于阳离子化铁蛋白液体中，室温下反应30 min。3. 0.1 mol/L磷酸缓冲液充分漂洗。4. 3％戊二醛固定，漂洗。5. 1％锇酸后固定，包埋同常规。6. 切片。必要时用硝酸铋染色，以提高铁蛋白反差。

聚乙烯亚胺染色法

1. 用 0.1 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液配 1％聚乙烯亚胺，含 2％蔗糖。2. 组织切成小块，浸泡在聚乙烯亚胺溶液中，室温下反应 30 min。3. 0.1 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液充分漂洗。4. 3％戊二醛固定，漂洗。5. 1％锇酸后固定，包埋，超薄切片，染色同常规。