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简介
虽然亲和层析法是进行特异性抗体纯化的首选,然而有时这种纯化方式却非必需,或者无法实施进行。在大多数锖况下,运铁蛋白可发生共沉淀或共纯化,能用凝胶滤过层析去除之。
来源:丁香实验
操作方法
1. 于4℃不断搅拌下,往2体积的含有IgG的混合物中,逐滴加入1体枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不间断地搅拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 离心20 min。 2. 用预冷的33% SAS溶液在漩涡混合器上振荡洗涤沉淀,所用溶液的体积与原含IgG的混合物等体积。 3. 在旋涡混合器上温和振荡以将沉淀溶于合适的预冷的缓冲液中(5%~10%的原始体积)
备选方案1. 准备好一根DEAE-Affi-Gel Blue柱子。用5倍柱床体积的加样缓冲液平衡(7 ml 柱床体积/ml 抗血清或腹水)。此步骤及以下各步均在4℃下操作实施。 2. 于4℃下透析样品40 h,中间换2次加样缓冲液(每次换大约4 L)加样上柱,速度为10 ml/h。用3倍柱床体积的加样缓冲液以10 ml/h 的速度洗脱未结合的蛋白质。 3. 用洗脱缓冲液以10 ml/