农杆菌感受态细胞制备实验

实验分类：

感受态细胞的制备及其转化

最新修订时间：2022-02-10

简介

农杆菌感受态细胞制备可用于：（1）建立农杆菌转化体系；（2）农杆菌表达系统构建；（3）农杆菌其他分子生物学研究。

来源：丁香实验

操作方法

氯化钙法

1. 挑取根癌农杆菌LBA4404单菌落于3 ml的YEB液体培养基（含Rif 50 mg/l）中，28℃振荡培养过夜。 2. 取过夜培养菌液1 ml接种于50 ml YEB（Rif 50 mg/l）液体培养基中，28℃振荡培养至OD600为0.5。 3. 取2 ml菌液，13 000 rpm，离心30 sec，弃上清。 4、加入1000 ul 20 mM CaCl2，使农杆菌细胞充分悬浮，

电转农杆菌感受态

1. 挑取单克隆接种于2 ml YEP（含50 mg/l链霉素）液体培养基，28℃，250 rpm，振荡培养过夜。（如用5 mlYEP，需培养36 h） 2. 将菌液按1:100转移至200 ml YEP（含50 mg/l链霉素）培养液中，28℃，250 rpm，振荡培养至OD=0.3(约4~5 h)。 3. 转入50 ml的无菌离心管，4℃，4 000 rpm离心10 min，弃上清。 4