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裂解BL21(DE3)plSs感受态细胞细菌蛋白方法

相关实验:农杆菌感受态细胞制备实验

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一只猫0GTR

看网上有人说反复冻融就可以激发细菌里面的溶菌酶,就可以裂解细菌了,为什么我反复冻融后,整个菌体像果冻一样?也离心不了

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2 个回答

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loveliufudan

有帮助

反复冻融可能会导致细菌膜破裂,释放出溶菌酶等细胞内容物,但这种方法并不可靠,同时也会破坏细胞内的其他蛋白质、DNA等分子。而且这种方法通常适用于某些特定的菌株和特定的表达质粒,不是所有的菌株和质粒都适用。

如果您的菌体像果冻一样,可能是因为在冻融的过程中,细胞壁或细胞膜已经被破坏了,导致整个细胞变得脆弱,甚至发生了溶解。这时候再进行离心操作,会发现细胞碎片难以分离。

如果您需要裂解BL21(DE3)pISs感受态细胞,可以考虑其他的细胞裂解方法,如超声波裂解、高压均质法、化学裂解等。这些方法可以有效地破坏细胞壁和细胞膜,释放出所需的蛋白质。但是需要注意的是,不同的方法会对目标蛋白的活性和稳定性产生不同的影响,选择合适的细胞裂解方法需要根据实验需要进行优化和测试。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

不需要反复冻融,外加溶菌酶就可以。

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